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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » TA克隆 7.7Kb大片段
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] TA克隆 7.7Kb大片段 已有11人参与

请教各位，7.7KB的大片段能够转进T载体吗？什么样子的T载体合适？转成功的关键点是什么？谢谢解答！
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1楼 2014-11-17 09:55:41
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by wendy73 at 2014-11-21 08:51:35
刚做了一个5Kb的，连接效率还是不错的，首先是用的LA酶还是PFU酶，确定是否末端加A，然后加长连接时间，我是连了5个小时，最后转化效率还是比较好的。如果能整段克隆就尽量不要分段去做，先试试吧

你好，请问你用的T载体是何种T载体？pMD-19 simple T载体吗？我现在用全式金的Trans-T试过，效果不是太好。还有，你的模板的浓度时多大？与载体是何种比例加的，谢谢！
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22楼2014-11-24 19:25:41
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MLN10000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:36:54
czcpudai: 金币+1, ★有帮助 2014-11-17 22:16:24
我认为可以 只要你计算好比例 祝你成功
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2楼2014-11-17 11:03:55
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caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:37:02
czcpudai: 金币+1, ★有帮助 2014-11-17 22:18:27
7.7K连上T载体难度很大，建议分段扩增，分段连接。
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3楼2014-11-17 11:04:14
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:37:09
czcpudai: 金币+1 2014-11-17 22:19:14
大片段的连接效率低是肯定的，连接的时候浓度要高。连接时间要长。
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学习再学习，努力再努力。
4楼2014-11-17 15:27:41
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