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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » TA克隆 7.7Kb大片段
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by czcpudai at 2014-11-17 22:20:11
谢谢！  怎么理解呢？...

就是 把7.7KB的大片段当载体用，把T载体当片段加。
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11楼2014-11-18 09:47:44
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维真生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Penter载体用过吗

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12楼2014-11-18 11:25:27
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枫林123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
czcpudai(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:16:22
7.7Kb的大片段采用TA克隆很困难，你可以尝试用同源重组的方法。ClonExpress Entry One Step Cloning Kit这个试剂盒是采用的是同源重组的方法，插入大片段也没有问题。希望对你实验有帮助。
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13楼2014-11-18 12:19:41
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小木sigh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-18 09:07:07
用T载体克隆的话，2～3kb效率比较高，超过5kb难度就比较大了，效率很低。ClonExpress Entry One Step Cloning Kit这个盒子你可以试一下，里面有个CE Entry vector，你可以把片段克隆到这个载体上面去，这个载体可以 ...

我们实验室也是用的这个，当时我的载体长度大概跟楼主差不多，8K左右，试过好几个盒子都没做出来，后来一个师兄推荐的这家的盒子，一开始还是没做出来，问了他们的技术，也算是运气好吧，一次就转出来了，我只记得那个技术好温柔啊 哈哈哈
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14楼2014-11-18 14:02:52
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
czcpudai(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:15:25
你把片段理解成载体，载体理解成片段就可以了，其实挺容易连进去的。
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15楼2014-11-19 16:09:17
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意萧02

木虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-11-25 13:15:37
我的片段5K,我也想问能连什么载体？

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16楼2014-11-19 16:15:03
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意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 小木sigh at 2014-11-18 14:02:52
我们实验室也是用的这个，当时我的载体长度大概跟楼主差不多，8K左右，试过好几个盒子都没做出来，后来一个师兄推荐的这家的盒子，一开始还是没做出来，问了他们的技术，也算是运气好吧，一次就转出来了，我只记得 ...

能问问怎么个温柔法吗？

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17楼2014-11-19 16:16:18
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这么大一个片段，最好切成小片段，分开克隆在连接吧。
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永远相信未知的总是美好的！
18楼2014-11-19 17:09:20
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by zshw_001 at 2014-11-19 17:09:20
这么大一个片段，最好切成小片段，分开克隆在连接吧。

我这个片段还是overlap扩出来的，用来表达化合物的，但是想做个TA克隆测序、现在觉得不是太好做，所以寻求大家更好的解决方法！谢谢
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19楼2014-11-20 21:21:45
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wendy73

禁虫 (初入文坛)
★ ★
czcpudai: 金币+2 2014-11-24 19:25:47
本帖内容被屏蔽
20楼2014-11-21 08:51:35
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