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kakabada123

新虫 (初入文坛)

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[交流] 上下游引物的设计问题已有3人参与

上下游引物的设计，
最早在NCBI--gene--输入（实验动物）空格（基因）方法，未搜出
通过文献找，找到一篇，问题一：我在copy时，下游引物抄错了，发给公司合成，会出现什么后果？
问题二：后来，我多看了一些文献，又发现一篇文献，但是同样动物，同样基因，不同序列。。是怎么回事呢？

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1楼 2014-11-16 19:30:14

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铁杆木虫 (知名作家)

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-17 10:38:05

建议你补充一下引物设计的基本知识。问题一的解答：这要看你错的多少了，比如说你引物上有酶切位点，你恰好又COPY错了，那么接下来有关酶切的实验步骤你是做不下去的；而如果错误的区域是在引物当中涉及CDS的区域，那么一旦影响到编码的蛋白或者终止密码子，引物肯定就不能用了的。问题二的解答：引物的设计常常以覆盖基因的CDS区域为基本要求，还跟你将来要插入的质粒有关。所以引物不是一定的，还可以在不影响引发效率和将来蛋白表达的情况下做一定碱基的修饰替换。我这样说肯定说不清，还是建议楼主补充一下相关方面的知识，网上关于引物设计的内容很多的。