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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求教DNA上下游引物设计的疑问
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奕术

铜虫 (小有名气)

[求助] 求教DNA上下游引物设计的疑问 已有2人参与

DNA设计引物进行PCR时  DNA的两条链不是反向互补吗？为什么上下游引物会不一样呢？
合成方向都是5----3，所以上下游引物是分别结合在两条链上的吧，所以上下游引物应该是一样的啊，也就是说只要一种引物就行了啊。
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1楼 2014-04-24 10:24:39
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★
奕术(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-24 17:34:28
引用回帖:
6楼: Originally posted by 奕术 at 2014-04-24 15:50:54
但是DNA双链不是应该反向互补的吗？也就是说两条链的序列应该是一样的啊。你这只是互补啊...

只能说明你对概念理解不透，什么叫反向？就是方向相反，何为DNA方向，这个方向也是人为定义的，就是将连接碱基之间的磷酸二酯键5‘--》3’的方向为DNA链的方向，方向与具体的碱基无关，即两条DNA链方向为：
5’ AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA 3‘
3’TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT5‘
这叫反向，一条5’--》3‘ ，一条3’--》5‘
你承认这是互补的双链么？你认为他们序列一样么？
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2014-04-24 16:38:27
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普通回帖

闲庭晓苑

新虫 (初入文坛)
介个。。。。你去百度一下就知道了
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2楼2014-04-24 10:35:17
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奕术

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 闲庭晓苑 at 2014-04-24 10:35:17
介个。。。。你去百度一下就知道了

问过度娘了   还是感觉不对劲
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3楼2014-04-24 10:52:06
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hutil1543

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-24 11:50:41
ATGCGCTACCTTAGCTTTTTTTTTCGC
TACGCGATGGAATCGAAAAAAAAAGCG
假设是这个DNA链你设计一队引物（每个3bp）你就明白了
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4楼2014-04-24 10:59:48
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 奕术 at 2014-04-24 10:52:06
问过度娘了   还是感觉不对劲...

...好好感觉，肯定不对劲！！
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5楼2014-04-24 12:05:03
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奕术

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-04-24 10:59:48
ATGCGCTACCTTAGCTTTTTTTTTCGC
TACGCGATGGAATCGAAAAAAAAAGCG
假设是这个DNA链你设计一队引物（每个3bp）你就明白了

但是DNA双链不是应该反向互补的吗？也就是说两条链的序列应该是一样的啊。你这只是互补啊
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6楼2014-04-24 15:50:54
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奕术

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-04-24 10:59:48
ATGCGCTACCTTAGCTTTTTTTTTCGC
TACGCGATGGAATCGAAAAAAAAAGCG
假设是这个DNA链你设计一队引物（每个3bp）你就明白了

ＤＮＡ双链 第一条链序列 与第二条链反向应该一样啊？？？
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7楼2014-04-24 16:06:47
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奕术

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gyesang at 2014-04-24 16:38:27
只能说明你对概念理解不透，什么叫反向？就是方向相反，何为DNA方向，这个方向也是人为定义的，就是将连接碱基之间的磷酸二酯键5‘--》3’的方向为DNA链的方向，方向与具体的碱基无关，即两条DNA链方向为：
...

是的 理解错了。以为DNA两条链的序列是一样的了。TKY
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9楼2014-04-24 16:49:10
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奕术

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gyesang at 2014-04-24 16:38:27
只能说明你对概念理解不透，什么叫反向？就是方向相反，何为DNA方向，这个方向也是人为定义的，就是将连接碱基之间的磷酸二酯键5‘--》3’的方向为DNA链的方向，方向与具体的碱基无关，即两条DNA链方向为：
...

DNA PCR的时候是两条序列不一样的双链，所以需要上下游引物。
但是，用cDNA当模板进行PCR时为什么也需要上下游引物呢？
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10楼2014-04-24 16:51:00
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