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rancase04

木虫 (正式写手)

[求助] 上下游引物退火温度相差16℃, 是不是不能p出来啊

采用文献上的引物 上下游引物退火温度分别为45.2℃和61.4℃,目的片段为1 k bp
pcr程序设定:
1:94℃ 5分钟→[94℃ 30秒;60℃ 30秒;72℃ 45秒]→5cycles→[94℃ 30秒;55℃ 30秒;72℃ 45秒]→35cycles→72℃ 5分钟
2:梯度pcr     94℃ 5分钟→[94℃ 30秒;40-60℃ 30秒;72℃ 45秒]→30cycles→72℃ 5分钟
两个程序均未看到目的条带,两个引物温度相差16℃,是不是不能p出来啊

[ Last edited by silicare on 2011-11-23 at 08:20 ]
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

rancase04(金币+3): 2011-12-26 20:40:30
也不一定的啊,看rp了,你既然看到目的条带了,就切了测序吧,反正测个序现在超便宜
2楼2011-11-21 21:10:31
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rancase04

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2011-11-21 21:10:31:
也不一定的啊,看rp了,你既然看到目的条带了,就切了测序吧,反正测个序现在超便宜

打错了个字  意思全变了   
是没有看到目的条带
3楼2011-11-22 23:22:53
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18853850850

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

rancase04(金币+5): 2011-12-26 20:40:19
不一定p 出来,目的片段1k bp,延伸时间至少要1分钟,我只,你设个70s再试试,我只看出这点了,因我在这上面犯过错,还有就是别少加什么了,建设你用一下PCR mix(就是里面只用加引物和模板就行了),祝你好运!
学自己想知道的
4楼2011-11-23 08:35:39
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tingl0087

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

rancase04(金币+4): 2011-12-26 20:40:09
内容已删除
5楼2011-11-23 09:24:48
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julietguo

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

rancase04(金币+4): 2011-12-26 20:40:02
你可以试试touchdown PCR啊
6楼2011-11-23 13:27:41
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btx362237729

金虫 (正式写手)

你的延伸时间太短了,建议去看看taq酶的活性在设计延伸时间,可以做touch down PCR试试,说不定就出结果了
人生最黑暗的时光终于过去了
7楼2012-06-25 16:48:18
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