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rancase04

木虫 (正式写手)

[求助] 上下游引物退火温度相差16℃, 是不是不能p出来啊

采用文献上的引物 上下游引物退火温度分别为45.2℃和61.4℃,目的片段为1 k bp
pcr程序设定:
1:94℃ 5分钟→[94℃ 30秒;60℃ 30秒;72℃ 45秒]→5cycles→[94℃ 30秒;55℃ 30秒;72℃ 45秒]→35cycles→72℃ 5分钟
2:梯度pcr     94℃ 5分钟→[94℃ 30秒;40-60℃ 30秒;72℃ 45秒]→30cycles→72℃ 5分钟
两个程序均未看到目的条带,两个引物温度相差16℃,是不是不能p出来啊

[ Last edited by silicare on 2011-11-23 at 08:20 ]
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btx362237729

金虫 (正式写手)

你的延伸时间太短了,建议去看看taq酶的活性在设计延伸时间,可以做touch down PCR试试,说不定就出结果了
人生最黑暗的时光终于过去了
7楼2012-06-25 16:48:18
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