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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白透析出现问题
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caihang

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白透析出现问题 已有3人参与

我的目的蛋白是包涵体，过柱后加入PEG4000，还原性和氧化性谷胱甘肽，在PH为7.4的TE Buffer（成分为100mMTris-HCl，10mMEDTA) 中透析,出现大量沉淀，跑蛋白胶后几乎看不到带，求支招。
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1楼 2014-11-12 21:55:38
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
caihang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-15 14:47:08
你的目的蛋白没有复性.必须先复性,再透析.
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2楼2014-11-15 01:32:13
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caihang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by winterb at 2014-11-15 01:32:13
你的目的蛋白没有复性.必须先复性,再透析.

透析的过程就是复性。
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3楼2014-11-15 16:50:59
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winterb

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
caihang: 金币+1 2014-11-15 21:32:18
透析的过程是脱盐.不是复性.
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4楼2014-11-15 20:33:16
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
caihang: 金币+3 2014-11-15 21:31:51
复姓buffer不合适。

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-11-15 21:27:13
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caihang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by myheat at 2014-11-15 21:27:13
复姓buffer不合适。

已经换了万金油buffer，希望这次不再出现沉淀。
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6楼2014-11-15 21:31:12
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caihang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by winterb at 2014-11-15 20:33:16
透析的过程是脱盐.不是复性.

那要怎样复性？
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7楼2014-11-15 21:35:13
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caihang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by myheat at 2014-11-15 21:27:13
复姓buffer不合适。

依然出现沉淀，请给一个buffer配方。
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8楼2014-11-16 12:56:05
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by caihang at 2014-11-16 12:56:05
依然出现沉淀，请给一个buffer配方。...

有个refolding的数据库。对照你蛋白的性质，自己筛选配方。

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2014-11-16 16:15:58
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白浓度是不是太高了   可以稀释下  再复性   复性的时候缓慢降低变性剂的浓度
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10楼2014-11-17 11:20:02
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