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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于蛋白质透析所遇到的问题
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wangchao_207

金虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白质透析所遇到的问题

我的蛋白质经过硫酸铵沉淀后用蒸馏水透析（无搅拌）三天，可是发现蛋白质沉淀了，很困惑这是什么原因，求大神解释，我担心离心后上清液中不会再有我的目的蛋白，是不是蛋白质透析时间太长了？
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加油吧奋斗吧
1楼 2012-09-10 10:48:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lpw106

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
沉淀的原因可能是多方面的  

各位老师的建议都很好

有些蛋白对盐浓度比较敏感   如果是蒸馏水透析的话   可能最终盐浓度很低  加上你的透析时间很长  从而导致了沉淀（我之前遇到过这样的情况，就是样品浑浊并伴随沉淀，过滤之后，短时间内样品会逐渐浑浊，最后试着往样品里加氯化钠，随着盐的溶解，样品逐渐变清澈，对于你的蛋白，我觉得你可以尝试一下）

另外，你用纯水透析，而纯水的pH可能与你的蛋白等电点接近，也可能会导致沉淀。

综上，建议用含盐的缓冲液进行透析，这样更稳定可控。

针对各位老师的建议，建议透析buffer不要用PB，因为部分蛋白样品在PB缓冲体系下冻存，会加剧聚合体的形成。这一点我们实验室遇到了2次（不同的蛋白）
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10楼2012-09-11 16:54:34
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xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 有道理 2012-09-11 07:03:06
好像要用buffer 透析，用水是否太剧烈，而且如果你的蛋白浓度大更容易沉淀！我建议你逐步改变溶液浓度，蛋白浓度不要太大！
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2楼2012-09-10 13:00:35
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华俊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-09-10 20:42:25
应当有ph缓冲和盐缓冲，应该在缓冲液中透析

如果后续试验允许的话，最好是使用缓冲液透析的，最常用的是PBS吧，这样也能保持蛋白活性，
楼主低盐透析莫非是用于标记吗
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多一份快乐少一分烦恼！
6楼2012-09-11 00:12:33
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普通回帖

wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuyihui2001 at 2012-09-10 13:00:35
好像要用buffer 透析，用水是否太剧烈，而且如果你的蛋白浓度大更容易沉淀！我建议你逐步改变溶液浓度，蛋白浓度不要太大！

我是把得到的沉淀溶于少量的蒸馏水中，然后再用蒸馏水透析，每次蛋白质都沉淀了，很郁闷，不知怎么搞得，我试试，谢谢
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加油吧奋斗吧
3楼2012-09-10 13:43:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-09-11 07:03:20
有些本来就是胶体或者暂时没有沉淀下去的东西，久了会沉淀的，我遇到过相似的情况。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2012-09-10 19:44:26
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-09-11 07:03:37
应当有ph缓冲和盐缓冲，应该在缓冲液中透析
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5楼2012-09-10 20:42:25
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wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 华俊 at 2012-09-11 00:12:33
如果后续试验允许的话，最好是使用缓冲液透析的，最常用的是PBS吧，这样也能保持蛋白活性，
楼主低盐透析莫非是用于标记吗...

不是，这是我的目的蛋白的粗提，我只是要分离纯化我的目的蛋白
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加油吧奋斗吧
7楼2012-09-11 08:08:36
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wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-09-10 20:42:25
应当有ph缓冲和盐缓冲，应该在缓冲液中透析

好的，我将试试，谢谢
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加油吧奋斗吧
8楼2012-09-11 08:09:34
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wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-09-10 19:44:26
有些本来就是胶体或者暂时没有沉淀下去的东西，久了会沉淀的，我遇到过相似的情况。

那意思是我的目的蛋白还存在上清液中？还有活性？
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加油吧奋斗吧
9楼2012-09-11 08:11:05
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