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wangchao_207金虫 (小有名气)
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[求助]
关于蛋白质透析所遇到的问题
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| 我的蛋白质经过硫酸铵沉淀后用蒸馏水透析（无搅拌）三天，可是发现蛋白质沉淀了，很困惑这是什么原因，求大神解释，我担心离心后上清液中不会再有我的目的蛋白，是不是蛋白质透析时间太长了？ |
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【答案】应助回帖
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沉淀的原因可能是多方面的 各位老师的建议都很好 有些蛋白对盐浓度比较敏感 如果是蒸馏水透析的话 可能最终盐浓度很低 加上你的透析时间很长 从而导致了沉淀（我之前遇到过这样的情况，就是样品浑浊并伴随沉淀，过滤之后，短时间内样品会逐渐浑浊，最后试着往样品里加氯化钠，随着盐的溶解，样品逐渐变清澈，对于你的蛋白，我觉得你可以尝试一下） 另外，你用纯水透析，而纯水的pH可能与你的蛋白等电点接近，也可能会导致沉淀。 综上，建议用含盐的缓冲液进行透析，这样更稳定可控。 针对各位老师的建议，建议透析buffer不要用PB，因为部分蛋白样品在PB缓冲体系下冻存，会加剧聚合体的形成。这一点我们实验室遇到了2次（不同的蛋白） |
10楼2012-09-11 16:54:34
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好的，我将试试，谢谢 8楼2012-09-11 08:09:34
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