应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于蛋白质透析所遇到的问题
131/2返回列表12下一页
查看: 2654  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wangchao_207

金虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白质透析所遇到的问题

我的蛋白质经过硫酸铵沉淀后用蒸馏水透析（无搅拌）三天，可是发现蛋白质沉淀了，很困惑这是什么原因，求大神解释，我担心离心后上清液中不会再有我的目的蛋白，是不是蛋白质透析时间太长了？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
加油吧奋斗吧
1楼 2012-09-10 10:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lpw106

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
沉淀的原因可能是多方面的  

各位老师的建议都很好

有些蛋白对盐浓度比较敏感   如果是蒸馏水透析的话   可能最终盐浓度很低  加上你的透析时间很长  从而导致了沉淀（我之前遇到过这样的情况，就是样品浑浊并伴随沉淀，过滤之后，短时间内样品会逐渐浑浊，最后试着往样品里加氯化钠，随着盐的溶解，样品逐渐变清澈，对于你的蛋白，我觉得你可以尝试一下）

另外，你用纯水透析，而纯水的pH可能与你的蛋白等电点接近，也可能会导致沉淀。

综上，建议用含盐的缓冲液进行透析，这样更稳定可控。

针对各位老师的建议，建议透析buffer不要用PB，因为部分蛋白样品在PB缓冲体系下冻存，会加剧聚合体的形成。这一点我们实验室遇到了2次（不同的蛋白）
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2012-09-11 16:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 有道理 2012-09-11 07:03:06
好像要用buffer 透析，用水是否太剧烈，而且如果你的蛋白浓度大更容易沉淀！我建议你逐步改变溶液浓度，蛋白浓度不要太大！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-09-10 13:00:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

华俊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-09-10 20:42:25
应当有ph缓冲和盐缓冲，应该在缓冲液中透析

如果后续试验允许的话，最好是使用缓冲液透析的，最常用的是PBS吧，这样也能保持蛋白活性，
楼主低盐透析莫非是用于标记吗
赞一下(1人) 回复此楼
多一份快乐少一分烦恼！
6楼2012-09-11 00:12:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuyihui2001 at 2012-09-10 13:00:35
好像要用buffer 透析，用水是否太剧烈，而且如果你的蛋白浓度大更容易沉淀！我建议你逐步改变溶液浓度，蛋白浓度不要太大！

我是把得到的沉淀溶于少量的蒸馏水中，然后再用蒸馏水透析，每次蛋白质都沉淀了，很郁闷，不知怎么搞得，我试试，谢谢
赞一下 回复此楼
加油吧奋斗吧
3楼2012-09-10 13:43:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-09-11 07:03:20
有些本来就是胶体或者暂时没有沉淀下去的东西，久了会沉淀的，我遇到过相似的情况。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2012-09-10 19:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-09-11 07:03:37
应当有ph缓冲和盐缓冲，应该在缓冲液中透析
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-10 20:42:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 华俊 at 2012-09-11 00:12:33
如果后续试验允许的话，最好是使用缓冲液透析的，最常用的是PBS吧，这样也能保持蛋白活性，
楼主低盐透析莫非是用于标记吗...

不是，这是我的目的蛋白的粗提，我只是要分离纯化我的目的蛋白
赞一下 回复此楼
加油吧奋斗吧
7楼2012-09-11 08:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-09-10 20:42:25
应当有ph缓冲和盐缓冲，应该在缓冲液中透析

好的，我将试试，谢谢
赞一下 回复此楼
加油吧奋斗吧
8楼2012-09-11 08:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-09-10 19:44:26
有些本来就是胶体或者暂时没有沉淀下去的东西，久了会沉淀的，我遇到过相似的情况。

那意思是我的目的蛋白还存在上清液中？还有活性？
赞一下 回复此楼
加油吧奋斗吧
9楼2012-09-11 08:11:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangchao_207 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-17 7/350 2026-03-20 10:48 by 星空星月
[考研] 08工学调剂 +4 用户573181 2026-03-20 4/200 2026-03-20 10:32 by 朗月清风1
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 14/700 2026-03-20 09:30 by kkcoco25
[考研] 329求调剂 +6 想上学吖吖 2026-03-19 6/300 2026-03-20 09:00 by 每天只摆一小会
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +3 sbdksD 2026-03-19 3/150 2026-03-19 23:21 by fmesaito
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 274求调剂 +6 S.H1 2026-03-18 6/300 2026-03-19 09:34 by 花店相见
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭