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wangchao_207

金虫 (小有名气)

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[求助] 关于蛋白质透析所遇到的问题

我的蛋白质经过硫酸铵沉淀后用蒸馏水透析（无搅拌）三天，可是发现蛋白质沉淀了，很困惑这是什么原因，求大神解释，我担心离心后上清液中不会再有我的目的蛋白，是不是蛋白质透析时间太长了？

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加油吧奋斗吧

1楼 2012-09-10 10:48:27

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lpw106

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

沉淀的原因可能是多方面的

各位老师的建议都很好

有些蛋白对盐浓度比较敏感如果是蒸馏水透析的话可能最终盐浓度很低加上你的透析时间很长从而导致了沉淀（我之前遇到过这样的情况，就是样品浑浊并伴随沉淀，过滤之后，短时间内样品会逐渐浑浊，最后试着往样品里加氯化钠，随着盐的溶解，样品逐渐变清澈，对于你的蛋白，我觉得你可以尝试一下）

另外，你用纯水透析，而纯水的pH可能与你的蛋白等电点接近，也可能会导致沉淀。

综上，建议用含盐的缓冲液进行透析，这样更稳定可控。

针对各位老师的建议，建议透析buffer不要用PB，因为部分蛋白样品在PB缓冲体系下冻存，会加剧聚合体的形成。这一点我们实验室遇到了2次（不同的蛋白）