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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 为什么TA克隆，测序有些不是目的片段，而是大肠杆菌的序列？
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

[求助] 为什么TA克隆，测序有些不是目的片段，而是大肠杆菌的序列？已有1人参与

各位虫友好！
RT，为什么会是大肠杆菌的序列（比对上100%）？难道是载体和大肠杆菌的序列连接上了，所以菌落在氨苄培养基上活了下来？欢迎有经验的虫友谈谈经验。
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TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
1楼2014-11-12 11:40:00
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
不知道这个实验是否需要x-gal啊
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
5楼2014-11-27 09:11:21
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)
我前段时间也是，一直没找到原因，只能从头做。
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2楼2014-11-12 11:44:59
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王冠傑

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
南海所老龚(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:03:05
亲：TA克隆的载体一般是PMD19-T（PUC19改造的）或者PGM－Teasy，不知道你用来测序的样本是公司提供的质粒还是菌液，如果是质粒测序的话是不应该出现大肠杆菌序列的，如果是菌液，后期培养过程中可能是被污染了。还有不知道你说的大肠杆菌序列是在哪儿比对的，能把序列发一下嘛？
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3楼2014-11-27 08:54:38
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王冠傑

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有一种可能：你扩增的片段就不对。所以你可以用扩增的片段测个序试试。
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4楼2014-11-27 08:58:23
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