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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菜鸟求助，有关真核表达质粒构建的问题
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1029745237zz

新虫 (初入文坛)

[求助] 菜鸟求助，有关真核表达质粒构建的问题 已有2人参与

虫友们，这两天有关质粒构建的问题一直困扰着我，希望知道的友友帮帮忙。我想知道构建真核表达质粒时，蛋白质的 CDS区得到的 cDNA,是不是不包括5”非编码区和3”非编码区，这样的质粒线性化插到动物基因组中，CDS 序列转录的RNA 是不是直接从起始密码子开始，不形成5”帽子结构，以至于翻译过程核糖体与 RNA 的结合能力有所下降，会在5”端任意序列结合。我这个思路对吗，哪里有问题，非常感谢。
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1楼 2014-11-06 15:51:24
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1029745237zz(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-06 20:27:13
虽然你插入的片段不含UTR，但实际上用的是表达载体的5'UTR序列。
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2楼2014-11-06 18:15:34
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
只需加kozak序列。

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3楼2014-11-06 20:58:01
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1029745237zz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 18:15:34
虽然你插入的片段不含UTR，但实际上用的是表达载体的5'UTR序列。

你好，启动子和CDS区之间有大约200bp碱基，我blast发现是loxp序列+misc feature序列。翻译过程核糖体与 RNA 的结合会在5”端任意序列结合，不一定是从第一次碱基开始，对吗，谢谢
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4楼2014-11-08 08:56:20
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1029745237zz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by myheat at 2014-11-06 20:58:01
只需加kozak序列。

谢谢，翻译一定是从第一个起始密码子开始吗
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5楼2014-11-08 08:59:09
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1029745237zz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-06 18:15:34
虽然你插入的片段不含UTR，但实际上用的是表达载体的5'UTR序列。

能不能帮我分析下图谱
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6楼2014-11-08 09:00:01
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 1029745237zz at 2014-11-08 08:59:09
谢谢，翻译一定是从第一个起始密码子开始吗...

肯定是从atg开始，除非有内含子

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7楼2014-11-08 09:39:08
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 1029745237zz at 2014-11-08 08:59:09
谢谢，翻译一定是从第一个起始密码子开始吗...

肯定是从atg开始，除非有内含子

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8楼2014-11-08 09:48:21
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 1029745237zz at 2014-11-08 09:00:01
能不能帮我分析下图谱...

你把图谱发上来，大家可以一起帮你看下。
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9楼2014-11-08 15:32:01
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