应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PET28a连接问题
51/1返回列表
查看: 2574  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] PET28a连接问题 已有3人参与

T4连接酶，6u目的片段（胶回收浓度偏低，30左右），2u载体，1u酶，1ulBuffer，16度连接过夜，板上干干净净，什么都没长。怎么回事？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
踏实
1楼 2014-11-05 10:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xy656691 at 2014-11-05 20:37:12
没问题，就这样做吧...

恩恩，谢谢版主，研一没人带我做实验，总是上课，研二刚开始做实验，带我们的师姐就出国了，两年，很谢谢版主的帮助。
赞一下 回复此楼
踏实
9楼2014-11-05 22:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:23:27
没长菌也不一定没有价值，起码可以说明，质粒是切开了的。建议：1，提高目的片段的浓度；2，多做几组比例的连接。祝试验顺利。
赞一下 回复此楼
2楼2014-11-05 12:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by caihang at 2014-11-05 12:14:50
没长菌也不一定没有价值，起码可以说明，质粒是切开了的。建议：1，提高目的片段的浓度；2，多做几组比例的连接。祝试验顺利。

目的片段200ng左右，我有个疑问，pcr产物用酶切吗
赞一下 回复此楼
踏实
3楼2014-11-05 14:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-06 20:36:06
1、PCR产物不一定能扩增出你的目的酶切位点
2、pcr产物先连克隆载体再切，胶回收（低温核酸易结合于硅胶模上，高温易分离）
3、目的基因和载体的浓度比大一点，10:1的体积都可以
4、转化的时候，注意热击时间不要过长，1min，42°够了，前后要冰浴
5、你的问题是连载体都没有转进去，所以你转化出问题了，自己作对照机会分析原因啦
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-05 14:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工270求调剂 +7 什么名字qwq 2026-03-02 7/350 2026-03-02 11:26 by yuchj
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +6 kyf化工 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:56 by 无际的草原
[考研] 264求调剂 +4 巴拉巴拉根556 2026-02-28 4/200 2026-03-02 10:48 by yuchj
[考研] 0856材料调剂 +4 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:19 by 公瑾逍遥
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 282求调剂 +3 2103240126 2026-03-02 4/200 2026-03-02 09:25 by 汪！？！
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭