应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PET28a连接问题
51/1返回列表
查看: 2854  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] PET28a连接问题 已有3人参与

T4连接酶，6u目的片段（胶回收浓度偏低，30左右），2u载体，1u酶，1ulBuffer，16度连接过夜，板上干干净净，什么都没长。怎么回事？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
踏实
1楼 2014-11-05 10:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-05 19:30:11
之前连t载测序正确的，以它没模版pcr不带信号肽的序列，然后回收，酶切，过柱回收，连接，有问题吗？大神帮忙看看
...

没问题，就这样做吧
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-05 20:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:23:27
没长菌也不一定没有价值，起码可以说明，质粒是切开了的。建议：1，提高目的片段的浓度；2，多做几组比例的连接。祝试验顺利。
赞一下 回复此楼
2楼2014-11-05 12:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by caihang at 2014-11-05 12:14:50
没长菌也不一定没有价值，起码可以说明，质粒是切开了的。建议：1，提高目的片段的浓度；2，多做几组比例的连接。祝试验顺利。

目的片段200ng左右，我有个疑问，pcr产物用酶切吗
赞一下 回复此楼
踏实
3楼2014-11-05 14:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-06 20:36:06
1、PCR产物不一定能扩增出你的目的酶切位点
2、pcr产物先连克隆载体再切，胶回收（低温核酸易结合于硅胶模上，高温易分离）
3、目的基因和载体的浓度比大一点，10:1的体积都可以
4、转化的时候，注意热击时间不要过长，1min，42°够了，前后要冰浴
5、你的问题是连载体都没有转进去，所以你转化出问题了，自己作对照机会分析原因啦
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-05 14:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 v7Aev8ORQjin 2026-08-22 3/150 2026-08-23 20:58 by 0p9y1isJp2jM
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 4/200 2026-08-23 20:46 by 0p9y1isJp2jM
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 19:34 by lXgU0RvNTDC9
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:34 by lXgU0RvNTDC9
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 19:22 by lXgU0RvNTDC9
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 19:10 by lXgU0RvNTDC9
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 18:55 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 4/200 2026-08-23 15:30 by KM5EcsNQRBPn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 5/250 2026-08-23 12:09 by LR9qGULyN2ew
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 07:41 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭