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Young-Tiger金虫 (小有名气)
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连接载体一直连不上 已有2人参与
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| 插入片段450bp，要连接的载体有7kb左右，一端平（StuI）一端粘（Bsu36I），浓度设置上，载体：50ng，载体插入片段摩尔比是1：3；连接酶，NEB的5min Quick Ligase 和promega的3h T4都用过了，还是没长出来。昨天一个关键的对照是，我用同样的插入片段同样的酶切位点连一个较小的载体（3kb pGEM）连接成功，所以问题总结后就是，同一个插入片段连小载体成功连大载体失败，请高手指点该怎么改进。 |
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