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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量标准品制备问题。谢谢
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920081341

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量标准品制备问题。谢谢 已有2人参与

大家好，最近做荧光定量PCR检测样品中的细菌，要用绝对定量的方法，看了好多资料标准品制备都是用质粒做的，让我不理解的是我要检测的是目的菌种的基因组，但却是用质粒做标准品，这是为什么呢？ 标准品和待检测样品的扩增条件不是要尽量一致吗，这样做的话模板本身不就不一致了吗？ 求教一下懂荧光定量PCR的高手解答，谢谢了。
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1楼 2014-10-14 17:28:47
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kittykbh

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 920081341 at 2014-10-15 22:36:47
没人知道吗，自己顶

是带有目的基因的质粒做为标准品，而不是单独质粒
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3楼2015-04-15 20:00:44
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920081341

金虫 (小有名气)
没人知道吗，自己顶

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-10-15 21:36:47
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hkj710

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

标准曲线的样品可以是你的CDNA，也可以是带有你的目的片段的质粒。一般来说，你可以提前将你的目的基因片段克隆到相应的载体中，提取质粒，精确测定浓度，然后梯度稀释，根据质粒大小可以换算成拷贝数，这样就可以作为标注曲线样本，就可以进行绝对荧光定量PCR
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4楼2015-04-16 03:32:28
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