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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆目的基因的问题
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yelon315

禁虫 (小有名气)
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1楼 2014-10-08 21:46:49
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-09 12:03:26
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7楼: Originally posted by yelon315 at 2014-10-09 11:28:13
谢谢你哈！
因为在ATG设计的引物是固定的，特异性不强，所以考虑在非编码区设计引物。我的实验目的就是转化拟南芥验证一下基因的功能，启动子到目的基因起始密码子中间的碱基个数不是3的倍数也无妨是吗？...

是，但尽量不要扩增太长了

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8楼2014-10-09 11:34:58
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mm的毛毛

木虫 (正式写手)

科研毛毛虫
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-12 22:54:25
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5楼: Originally posted by yelon315 at 2014-10-09 11:24:56
不需要融合表达，只是想用来转化拟南芥做功能验证的~...

转基因做功能验证的话，是不需要考虑那么多的，基因启动是在ATG开始识别的。可以加一定长度的非编码区。不是用特异启动子吧，应该是用35s启动的吧。
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好想睡个好觉
9楼2014-10-09 14:02:27
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-09 12:03:14
1.可以
2. 这要取决于你的表达载体是否是融合表达，如果是就要考虑移码突变，如果不是就不用考虑了

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2楼2014-10-08 21:52:56
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yunshenglmm

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-09 12:03:18
只听说在ATG前加酶切位点的，没有听说加非编码区的，仔细讲一下楼主的实验目的，另外仔细看一下你的质粒序列，如果启动子后面没有ATG，加非编码序列没有问题
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3楼2014-10-08 22:22:56
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青师大涛声

铜虫 (小有名气)
学习。
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好好做实验。
4楼2014-10-08 23:40:42
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yelon315

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5楼2014-10-09 11:24:56
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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5楼: Originally posted by yelon315 at 2014-10-09 11:24:56
不需要融合表达，只是想用来转化拟南芥做功能验证的~...

那就可以在cds上游开始扩增，而且不需要考虑三的倍数！

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6楼2014-10-09 11:27:40
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yelon315

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7楼2014-10-09 11:28:13
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yelon315

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10楼2014-10-09 14:50:08
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