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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蛋白纯化求助~
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lihuahan

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化求助~

N端融合6*His标签后原核表达，现在低温诱导后可溶性目的蛋白明显增加，但不知道够不够做纯化的量，大侠们帮忙鉴定一下~
Lane1： Maker；
Lane2: 16℃过夜诱导后上清，IPTG终浓度为0.4M；
Lane3: 16℃过夜诱导后沉淀，IPTG终浓度为0.4M；
Lane4: 25℃ 6h诱导后上清，IPTG终浓度为0.4M；
Lane5: 25℃ 6h诱导后沉淀，IPTG终浓度为0.4M；
Lane6: 37℃ 3h诱导后上清，IPTG终浓度为0.4M；
Lane7: 37℃ 3h诱导后沉淀，IPTG终浓度为0.4M；
还有一些关于蛋白纯化的问题，
1. 蛋白纯化时有的用Tris之类的缓冲液，有的用磷酸盐缓冲液，这两种有什么区别吗？哪种效果更好一些？
2. 纯化时缓冲液的PH值应该怎样去确定？看到有人说低于或高于蛋白质的等电点1左右，这样是否可行？
3. 想自己装柱子，有看到亲和层析柱工具套装，有人用过吗？这个效果怎么样？纯化过程是否都需要在4℃进行？

蛋白纯化求助~
K9W(XRE5}IP)NV0T3KUVSM3.jpg
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1楼 2014-10-07 16:34:34
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