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[求助]
蛋白纯化求助~
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N端融合6*His标签后原核表达，现在低温诱导后可溶性目的蛋白明显增加，但不知道够不够做纯化的量，大侠们帮忙鉴定一下~ Lane1： Maker； Lane2: 16℃过夜诱导后上清，IPTG终浓度为0.4M； Lane3: 16℃过夜诱导后沉淀，IPTG终浓度为0.4M； Lane4: 25℃ 6h诱导后上清，IPTG终浓度为0.4M； Lane5: 25℃ 6h诱导后沉淀，IPTG终浓度为0.4M； Lane6: 37℃ 3h诱导后上清，IPTG终浓度为0.4M； Lane7: 37℃ 3h诱导后沉淀，IPTG终浓度为0.4M； 还有一些关于蛋白纯化的问题， 1. 蛋白纯化时有的用Tris之类的缓冲液，有的用磷酸盐缓冲液，这两种有什么区别吗？哪种效果更好一些？ 2. 纯化时缓冲液的PH值应该怎样去确定？看到有人说低于或高于蛋白质的等电点1左右，这样是否可行？ 3. 想自己装柱子，有看到亲和层析柱工具套装，有人用过吗？这个效果怎么样？纯化过程是否都需要在4℃进行？  K9W(XRE5}IP)NV0T3KUVSM3.jpg |
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