24小时热门版块排行榜    

查看: 2526  |  回复: 3

qauzgd

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物连接T载体涂板不长菌落 已有1人参与

首先,用1000+的PCR片段(纯化,没有做胶回收)按说明书操作连接PEASY-1以及18t载体,然后涂板子37度过夜。。。一个斑都没有。 用的TAQ酶,确认加A。
然后,第二天把涂板剩下的菌液(4度保存的)摇菌2h再涂板子,均匀的蓝白斑,但是白斑用M13通用引物做菌液PCR,结果全是空载体和二聚体的小片段。
这个问题快半个月了,求大侠们指点!谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-07 12:23:55
连接时间保证在20分钟之内,另外直接用TAQ加A也不是很稳定,实在不行就换平末端试剂盒。你说的细节太少,我只能说这么多。
2楼2014-10-07 01:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qauzgd

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qapollo at 2014-10-07 01:02:11
连接时间保证在20分钟之内,另外直接用TAQ加A也不是很稳定,实在不行就换平末端试剂盒。你说的细节太少,我只能说这么多。

谢谢,不过EASY载体连的15min,18T半小时和两小时都试过的。
其实我最想不明白的是为什么第一次都不长斑,难道是转化的效率不高,然后剩下的菌液4度过夜,载体又自己转进去了吗?!
3楼2014-10-07 10:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qauzgd

铁虫 (初入文坛)

大家帮忙看看,会不会是转化的问题啊。。。谢谢
4楼2014-10-07 14:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qauzgd 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见