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汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2006  |  回复: 7

zengsihai

木虫 (小有名气)

iloveemuch

[求助] 测序结果不好的序列能够做系统发育树吗? 已有2人参与

各位虫友:
     小弟对一株真菌PCR其ITS区,送测序后效果不好,要求是双向测序并且拼接,但是生工告知无法拼接,仅有两条两个方向的测序结果。但是,BLASTN比对有找到相似性,与Fusarium solani相似达99%,可以知道该菌应该是茄镰刀菌了,但是我尝试在NCBI上下载它的一些近似种镰刀菌,拟做一个系统发育树,以期进一步分析它的种属,好提炼一些观点,可是用CLUSTAL X和MEGA6.0,发现待分析序列与下载的已知序列相比,一段一段的,能做出系统发育树吗?
    虫友,象我这种情况,仅有一个方向的序列能够做出系统发育树吗,盼您的指教。
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zengsihai
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zengsihai(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-11 09:25:36
这个要看你单向测序的质量,就是看一下峰图,一般只要测序成功,结果的前800个还是比较可信的。是可以用这段序列建树的,不过要从你下载的序列截取出与测序结果相对应的序列,再建树。
2楼2014-09-10 22:50:37
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zengsihai

木虫 (小有名气)

iloveemuch

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-09-10 22:50:37
这个要看你单向测序的质量,就是看一下峰图,一般只要测序成功,结果的前800个还是比较可信的。是可以用这段序列建树的,不过要从你下载的序列截取出与测序结果相对应的序列,再建树。

但是我的送检的反应物,测出是541bp,可信度如何,可以自己尝试着拼接吗?即使有二聚体,也可以拼接成功吗?
zengsihai
3楼2014-09-11 06:19:40
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zengsihai(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-11 09:25:51
99%相似是用什么序列去比的,如果是你测出来的话应该没什么大问题了。不过最好再测一次,如果你做进化树里面有很多99%就可能不准了
4楼2014-09-11 08:15:44
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zengsihai at 2014-09-11 06:19:40
但是我的送检的反应物,测出是541bp,可信度如何,可以自己尝试着拼接吗?即使有二聚体,也可以拼接成功吗?...

你要扩多大的片段?直接测序还是连载体测序?
5楼2014-09-11 09:41:43
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zengsihai

木虫 (小有名气)

iloveemuch

引用回帖:
4楼: Originally posted by bwangel at 2014-09-11 08:15:44
99%相似是用什么序列去比的,如果是你测出来的话应该没什么大问题了。不过最好再测一次,如果你做进化树里面有很多99%就可能不准了

将生工公司的测序报告的txt文本,粘贴到NCBI的BLASTN比对的文本框内,点击"BLASTN",弹出一些序列来,选取99%或者100%的进行判定。用真菌的its区进行比对的。
zengsihai
6楼2014-09-11 10:51:49
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zengsihai

木虫 (小有名气)

iloveemuch

引用回帖:
5楼: Originally posted by stone2239 at 2014-09-11 09:41:43
你要扩多大的片段?直接测序还是连载体测序?...

约650BP片段,直接测序,产物未纯化(是那种短频快式的),意在鉴定感兴趣的真菌。
zengsihai
7楼2014-09-11 10:53:32
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议还是双向测通拼接最好
8楼2014-09-11 13:33:12
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