应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用鉴定真菌的通用引物its1、its4，为何扩出目的条带呢
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 8688  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zans2009

铜虫 (初入文坛)

[求助] 用鉴定真菌的通用引物its1、its4，为何扩出目的条带呢 已有3人参与

刚筛选出4种真菌，用通用引物做pcr，从电泳图上看，请问我出了哪些问题呢？
1号出现弥散条带，2号条带范围从400bp到550bp间，3、4号出现了不止一个条带，而且最大的达到5000bp，我弄错了什么吗？没分离完全？还是PCR出了问题？

反应温度如下：
94℃      3min

94℃       30s
55℃      45s
72℃      1min
35cycle

72℃      3min

通用引物
ITSl(5’一TCC GTA GGT GAA CCT GCGG-3’)
ITS4(5’一TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC一3’)

四种DNA浓度分别为15ng/ul、31ng/ul、 168ng/ul、 27ng/ul、
260/280分别为1.77、1.63、1.82、1.74。

谢谢了

用鉴定真菌的通用引物its1、its4，为何扩出目的条带呢
2014-8-26 _副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-27 10:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zans2009 at 2014-08-27 11:46:22
我筛出4种真菌，做PCR是打算胶回收后测序做鉴定的，用its通用引物P出真菌的its2序列应该是500bp左右吧。现在3、4号出现5kb的条带，而且500bp处的条带不如1、2号那么明显，心里没谱了...

楼主可以尝试把退火温度再降几度,模板稀释20-50倍,再做PCR!
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-27 12:59:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

zans2009

铜虫 (初入文坛)
对了，25ul体系，PCR时引物加1ul、DNA加3ul。
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-27 10:19:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zans2009(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:14:35
引用回帖:
2楼: Originally posted by zans2009 at 2014-08-27 10:19:16
对了，25ul体系，PCR时引物加1ul、DNA加3ul。

DNA模板太多了,可以稀释20-50倍加1ul！另外不知道楼主的目的是什么，只从电泳图看，1号2号P的挺好，不存在弥散条带，胶回收下就好了，没问题。3号4号条带多说明你的引物出现了非特异性扩增，毕竟你用的通用引物这个很正常，只要有你想要的目的片断就可以了，胶回收就可以了！
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-27 11:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zans2009

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-08-27 11:03:15
DNA模板太多了,可以稀释20-50倍加1ul！另外不知道楼主的目的是什么，只从电泳图看，1号2号P的挺好，不存在弥散条带，胶回收下就好了，没问题。3号4号条带多说明你的引物出现了非特异性扩增，毕竟你用的通用引物这个 ...

我筛出4种真菌，做PCR是打算胶回收后测序做鉴定的，用its通用引物P出真菌的its2序列应该是500bp左右吧。现在3、4号出现5kb的条带，而且500bp处的条带不如1、2号那么明显，心里没谱了
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-27 11:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08开头275求调剂 +3 拉谁不重要 2026-03-26 3/150 2026-03-26 20:22 by barlinike
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 275求调剂 +9 Micky11223 2026-03-25 11/550 2026-03-26 15:54 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭