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琢研

铜虫 (小有名气)

[求助] 真菌多样性研究中引物选择问题~~~ 已有3人参与

小妹初涉分子,将做真菌多样性研究,采用高通量方法,有如下疑问向各位大虾请教:1、这个方法选用18S还是ITS作为引物的结果更准确啊?2、因为我们实验室之前未涉及分子方面的研究,土壤样品采回后一部分用于分析理化,另一部分则储存于-80摄氏度冰箱,最早期的样品接近两年时间,所以想问下--这种低温长时间储存会对结果造成什么样的影响呢?
        谢谢大家~不胜感激~
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

同问,帮顶。不过你的样品-80度放两年,这个时间也太长了吧,对做分子方面的实验多少不利。
2楼2014-08-14 18:08:36
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琢研

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-08-14 18:08:36
同问,帮顶。不过你的样品-80度放两年,这个时间也太长了吧,对做分子方面的实验多少不利。

对啊!其实主要想知道影响有多大?得到的结果是否还有用?不然花了大量人力财力物力,结果不能用,那就糟糕了啊???    ps:你也是做相关研究的么??
3楼2014-08-15 10:26:21
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 琢研 at 2014-08-15 10:26:21
对啊!其实主要想知道影响有多大?得到的结果是否还有用?不然花了大量人力财力物力,结果不能用,那就糟糕了啊???    ps:你也是做相关研究的么??...

是的,不过还没开始,准备要做的。感觉做真菌多样性研究的文章选ITS的似乎多一点。你想知道影响有多大,取个样出来提DNA,看看提的质量如何。
4楼2014-08-15 12:01:20
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539595873

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
呃,2年。。。。。。估计做不出来什么东西了。。。
如果是做多样性,可以用DGGE,我做海洋底泥细菌多样性就用的这个。18S是测序用的,需要纯品。ITS是什么东西,没用过。。。
考博的苦逼孩子
5楼2014-08-15 14:17:56
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 539595873 at 2014-08-15 14:17:56
呃,2年。。。。。。估计做不出来什么东西了。。。
如果是做多样性,可以用DGGE,我做海洋底泥细菌多样性就用的这个。18S是测序用的,需要纯品。ITS是什么东西,没用过。。。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1935213
6楼2014-08-15 14:44:43
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天52琳

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多样性的话 可以采用Est SSR RAPD等这些分子标记比较好,ITS是真菌里面最常用的DNA条形码序列,有非常高的赞誉,建议用ITS 18S 用于属以上的系统分析 但目前在真菌里面,利用18S 28S EF1-a RPB1 RPB2 beta-tublin等多基因序列进行分析的比较多
7楼2014-08-15 20:38:16
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琢研

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-08-15 12:01:20
是的,不过还没开始,准备要做的。感觉做真菌多样性研究的文章选ITS的似乎多一点。你想知道影响有多大,取个样出来提DNA,看看提的质量如何。...

嗯~~~这个可以有!!!我也还没开始做呢!现在还处于看文献找方法阶段。好捉急的~~
    你课题组有师兄师姐做过相关的么?
    ITS可以做原核生物多样性么??
8楼2014-08-16 16:58:02
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琢研

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 天52琳 at 2014-08-15 20:38:16
多样性的话 可以采用Est SSR RAPD等这些分子标记比较好,ITS是真菌里面最常用的DNA条形码序列,有非常高的赞誉,建议用ITS 18S 用于属以上的系统分析 但目前在真菌里面,利用18S 28S EF1-a RPB1 RPB2 beta-tublin等 ...

O(∩_∩)O谢谢~初入分子~脑补中!!!受教啦~~~
9楼2014-08-16 17:07:06
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 琢研 at 2014-08-16 16:58:02
嗯~~~这个可以有!!!我也还没开始做呢!现在还处于看文献找方法阶段。好捉急的~~
    你课题组有师兄师姐做过相关的么?
    ITS可以做原核生物多样性么??...

实验室以前没人做啊,老板突然想做这一块。做原核生物比如细菌一般就用16s rDNA了。你做高通量打算用什么测序平台?
10楼2014-08-16 17:27:29
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