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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 表达载体构建，比较两种方法
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 表达载体构建，比较两种方法 已有1人参与

今天看文献，关于表达载体构建，有的人是将测序正确的基因双酶切后连接到PET28b,然后转化入DH5a，挑单菌落，测序正确后在提质粒，转化到BL21，挑单菌落，坐后面的诱导实验。本人是新手，不知道这样做的好处是什么？我直接连接到PET28b之后转入BL21，应该也是可以的，前者相对于后者的优点是什么？
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踏实
1楼 2014-08-25 17:25:32
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-25 22:03:58
理论上是可以的，BL21的感受态效率不如DH5a，直接转不容易进去。最好过渡一下，直接转化BL21（DE3）重组蛋白可能会有基础表达，对宿主菌有毒性。
赞一下(2人) 回复此楼
。
2楼2014-08-25 18:46:37
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-08-25 18:46:37
理论上是可以的，BL21的感受态效率不如DH5a，直接转不容易进去。最好过渡一下，直接转化BL21（DE3）重组蛋白可能会有基础表达，对宿主菌有毒性。

谢谢你的解答
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踏实
3楼2014-08-25 19:32:19
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bolysu

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2014-08-25 22:09:13
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