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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 表达载体构建,比较两种方法 已有1人参与

今天看文献,关于表达载体构建,有的人是将测序正确的基因双酶切后连接到PET28b,然后转化入DH5a,挑单菌落,测序正确后在提质粒,转化到BL21,挑单菌落,坐后面的诱导实验。本人是新手,不知道这样做的好处是什么?我直接连接到PET28b之后转入BL21,应该也是可以的,前者相对于后者的优点是什么?
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踏实
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bolysu

禁虫 (著名写手)

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4楼2014-08-25 22:09:13
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-25 22:03:58
理论上是可以的,BL21的感受态效率不如DH5a,直接转不容易进去。最好过渡一下,直接转化BL21(DE3)重组蛋白可能会有基础表达,对宿主菌有毒性。
2楼2014-08-25 18:46:37
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2014-08-25 18:46:37
理论上是可以的,BL21的感受态效率不如DH5a,直接转不容易进去。最好过渡一下,直接转化BL21(DE3)重组蛋白可能会有基础表达,对宿主菌有毒性。

谢谢你的解答
踏实
3楼2014-08-25 19:32:19
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