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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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flll2014

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] 组氨酸结合镍柱问题 已有5人参与

请问下大家,我的目的蛋白里面中间有两个组氨酸,但是离的特别远,会结和在镍柱上面吗?一般的组氨酸标签不是六个组氨酸标签吗?为什么我的目的蛋白也会结合在柱子上呢?
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flll2014

兑换贵宾

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引用回帖:
2楼: Originally posted by salanero2000 at 2014-08-27 10:09:59
能结合Ni应该是好事吧?
并不是说6个His都存在才能和Ni结合,只是为了保障有His暴露在外端。

不是,我打算去his标签的,如果目的蛋白结合在镍柱上的话,那就没办法得到我的蛋白质了
3楼2014-08-27 10:56:01
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salanero2000

兑换贵宾

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
能结合Ni应该是好事吧?
并不是说6个His都存在才能和Ni结合,只是为了保障有His暴露在外端。
2楼2014-08-27 10:09:59
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salanero2000

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by flll2014 at 2014-08-27 10:56:01
不是,我打算去his标签的,如果目的蛋白结合在镍柱上的话,那就没办法得到我的蛋白质了...

去His标签是不是需要看你目的蛋白和纯化标签之间是否存在酶切位点?
另外目的蛋白结合Ni柱洗脱不久不是可以得到你的蛋白质了吗?
4楼2014-09-01 11:16:55
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flll2014

主管区长

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引用回帖:
4楼: Originally posted by salanero2000 at 2014-09-01 11:16:55
去His标签是不是需要看你目的蛋白和纯化标签之间是否存在酶切位点?
另外目的蛋白结合Ni柱洗脱不久不是可以得到你的蛋白质了吗?...

纯化标签和目的蛋白之间本来就有酶切位点,我是直接拿酶去切his标签的,切完之后,重新挂柱,正常的应该是标签挂柱,目的蛋白流穿,但是现在的情况是标签和蛋白都结合在柱子上了。用高浓度咪唑洗脱后既有标签又有目的蛋白,还有没切完全的融合蛋白,这样的话就没法分离出目的蛋白了
5楼2014-09-02 20:52:48
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