| 查看: 11471 | 回复: 13 | ||
shizishanshang至尊木虫 (职业作家)
|
[求助]
请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到我的蛋白上去？ 已有1人参与
|
|
|
大家好，我实验过程中需要做几个抗体（这些是一抗），向老外咨询制作过程，回信说 The best is to subclone the hydrophilic loop of A proteins or cytoplasmic region of B proteins, express in the E. coli with His-tag, purify the protein and send it for immunization in Rabbit or Rat or Mouse. 因为我做的是两大类蛋白，姑且以A和B代替。 我看老外的意思是要我分别克隆一段特殊的序列（这个序列我知道，就是我的蛋白的其中一段），然后加上 His-tag（组氨酸标签）在E. coli 中表达，然后再提取纯化蛋白后在兔子或老鼠中获得抗体？ 这中间有个问题，怎么加上 His-tag（组氨酸标签）？是直接设计引物引进 His-tag（组氨酸标签），还是按照有些人说的转到PET-30a这样还有 His-tag（组氨酸标签）的载体上获得？ 请问有没有同学做过加 His-tag（组氨酸标签）的实验啊，请指教啊！ [ Last edited by silicare on 2014-3-28 at 14:03 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
3-溴吡啶-4-甲醛合成
已经有9人回复
-
求调剂
已经有19人回复
-
材料专硕322
已经有6人回复
-
一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂
已经有3人回复
-
285求调剂
已经有9人回复
-
材料求调剂
已经有11人回复
-
调剂
已经有8人回复
-
材料调剂
已经有14人回复
-
材料334求调剂
已经有17人回复
-
332求调剂
已经有16人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 加我一个又怎样
已经有10人回复
- 组氨酸结合镍柱问题
已经有16人回复
- 如何去除C端标签
已经有5人回复
- His tag结合问题
已经有4人回复
- His tag真核细胞蛋白纯化
已经有11人回复
- 请教pcDNA3.1上酶切位点的问题
已经有6人回复
- 急！500kD 蛋白western 求助
已经有17人回复
- 10%NaOH是怎么加的
已经有13人回复
- 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到酶蛋白上？
已经有20人回复
- 蛋白前面有一个his-tag和sumo-tag,想去掉sumo-tag，只留下一个his-tag，该怎么做
已经有5人回复
- His tag antibody如何选择？
已经有6人回复
- GST 和 His Tag的选择
已经有7人回复
- 带HIS-tag标签蛋白过NI-NDA挂不上柱子
已经有5人回复
- HIS标签的蛋白不挂柱，求助
已经有6人回复
- 关于pET32a的HIS标签
已经有10人回复
- 求his标签蛋白纯化步骤
已经有3人回复
- EST标签的这个“标签”指的是什么？
已经有4人回复
- His Tag融合蛋白纯化
已经有8人回复
- 关于变性条件下his-tag重组融合蛋白不结合镍柱以及部分结合镍柱情况
已经有17人回复
- 为什么用胰蛋白酶消化细胞？
已经有6人回复
- 怎样在表达载体质粒接上His tag标签
已经有8人回复
- 【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
已经有17人回复
- 【求助/交流】酵母表达外源蛋白，His-tag降解怎么办
已经有5人回复
alarace
至尊木虫 (知名作家)
- BioEPI: 1
- 应助: 82 (初中生)
- 金币: 20153.9
- 散金: 15172
- 红花: 20
- 帖子: 9173
- 在线: 2797.4小时
- 虫号: 1546961
- 注册: 2011-12-22
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-12-10 08:35:35
muchong5577
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 929.2
- 散金: 67
- 红花: 3
- 帖子: 675
- 在线: 136.6小时
- 虫号: 703384
- 注册: 2009-02-18
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shizishanshang: 金币+5, ★★★很有帮助, 多谢，我研究载体图谱后再交流啊 2012-12-10 13:56:58
感谢参与，应助指数 +1
shizishanshang: 金币+5, ★★★很有帮助, 多谢，我研究载体图谱后再交流啊 2012-12-10 13:56:58
|
6楼的方法不对。 pET系列的载体有些是专门能提供某些标签的融合表达，如pET30a，多克隆位点上从上到下分别有His-Tag、S-Tag、His-Tag。在每个这些标签的中间都有酶切位点，如果你表达的蛋白想带上某个标签，你只要根据质粒图谱设计引物就行，不需要在引物上加所带标签的序列，简而言之，就是利用载体本身的标签。比如，你想使用pET30a带上His-Taq，你的上游引物可设计从5端有NdeI 的酶切位点，下游引物设计为S-Tag标签后，His-Tag标签前这段序列中有的酶切位点，不过建议还是采用XhoI ，因为这样表达出蛋白最短。另外要注意的是，引物设计的时候要考虑到翻译，不要造成移码突变。 |
7楼2012-12-10 11:24:53
2楼2012-12-08 21:21:01
静安jingan
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 86 (初中生)
- 贵宾: 0.932
- 金币: 9295.7
- 散金: 2894
- 红花: 43
- 沙发: 28
- 帖子: 4233
- 在线: 1412.1小时
- 虫号: 2005883
- 注册: 2012-09-16
- 性别: MM
- 专业: 免疫相关疾病其他科学问题
3楼2012-12-09 11:15:12
shizishanshang
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 72 (初中生)
- 金币: 10570.4
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 3882
- 在线: 1215.1小时
- 虫号: 297159
- 注册: 2006-11-18
- 性别: GG
- 专业: 植物学
4楼2012-12-09 22:21:32
6楼2012-12-10 10:12:45
zx1984
木虫 (正式写手)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 7613.7
- 散金: 2765
- 红花: 2
- 帖子: 434
- 在线: 383.8小时
- 虫号: 1176692
- 注册: 2010-12-24
- 性别: GG
- 专业: 出血、凝血与血栓
8楼2012-12-10 13:15:02
9楼2014-03-27 19:51:18
muchong5577
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 929.2
- 散金: 67
- 红花: 3
- 帖子: 675
- 在线: 136.6小时
- 虫号: 703384
- 注册: 2009-02-18
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
10楼2014-03-28 13:54:56
