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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 如何去除C端标签
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hugeneuron

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何去除C端标签 已有2人参与

我设计一个融合蛋白的思路是这样的（从N端开始写）：
蛋白A--肽B--蛋白C
我希望能通过设计找到一个内切酶在蛋白A和肽B之间水解肽键，把整条链分成
蛋白A   和   肽B--蛋白C

蛋白A是抗体的Fc片段，含有甲硫氨酸和半胱氨酸。蛋白C无特殊要求。
用什么样的肽B和内切酶比较合适呢？
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1楼 2014-05-17 23:43:21
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-18 17:18:26
在你设计融合蛋白的时候就应该把蛋白酶切位点添加进去，表达出来后用原先设计好的酶切。
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2楼2014-05-18 09:51:50
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junboliang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-18 17:18:34
hugeneuron: 金币+5, ★有帮助 2014-05-22 18:04:00
我的理解是：您想在一个载体上实现两个目的蛋白的表达，可以在两个蛋白之间加入T2A序列，具体做法可以参考文献：http://www.plosone.org/article/i ... ournal.pone.0018556
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3楼2014-05-18 10:01:15
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hugeneuron

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-05-18 09:51:50
在你设计融合蛋白的时候就应该把蛋白酶切位点添加进去，表达出来后用原先设计好的酶切。

我知道。。我还在设计。我需要找的就是在识别序列的N端切的酶。
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4楼2014-05-22 17:49:23
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hugeneuron

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by junboliang at 2014-05-18 10:01:15
我的理解是：您想在一个载体上实现两个目的蛋白的表达，可以在两个蛋白之间加入T2A序列，具体做法可以参考文献：http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0018556

不是。我用两个载体同时转染细胞。
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5楼2014-05-22 17:51:55
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hugeneuron

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by junboliang at 2014-05-18 10:01:15
我的理解是：您想在一个载体上实现两个目的蛋白的表达，可以在两个蛋白之间加入T2A序列，具体做法可以参考文献：http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0018556

我需要先表达出
蛋白A--肽B--蛋白C
然后柱层析纯化。
然后再切。
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6楼2014-05-22 18:05:11
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