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Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】His标签 已有1人参与

我想把六个组氨酸的标签加到目的蛋白的N-末端，不知道改怎么做。。。
我看到pET28a 是带组氨酸标签的载体，但是我要用的是酵母表达载体pPIC3.5K，这个载体带有组氨酸标签吗？如果没有，我是不是要先把目的基因克隆到pET28a上呢？我应该怎么做呀？求各位师兄师姐帮帮我，谢谢~~~
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1楼 2010-11-04 10:36:16
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):热心鼓励。 2010-11-04 10:57:17
Claire_Liu(金币+2): 2010-11-04 12:21:19
Claire_Liu(金币+2):多谢 2010-11-04 12:26:35
载体没有的话就在克隆的时候加上His-tag编码序列。
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2楼2010-11-04 10:41:35
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★
dhd997(金币+1):热心鼓励。 2010-11-04 10:57:06
Claire_Liu(金币+2):不是很明白，能再详细一点吗？谢谢啦~~ 2010-11-04 12:26:23
载体上直接添加His-tag编码序列就可以，但是注意序列的顺序、碱基数目等别搞错了哦！
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3楼2010-11-04 10:49:55
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Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-11-04 10:41:35:
载体没有的话就在克隆的时候加上His-tag编码序列。

是不是在设计引物的时候加上六个组氨酸的编码序列，那引物会不会太长了呢？
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4楼2010-11-04 12:24:41
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猪会飞

荣誉版主 (文坛精英)

猪猪家族之猪会飞

优秀版主
加His-tag编码序列在载体上
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俺有一双隐形的翅膀~~~
5楼2010-11-04 12:42:15
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playboy723

金虫 (正式写手)
Claire_Liu(金币+2):嗯，谢谢，我打算用你这个方法，你是做这方面的吗？我QQ是343468898，可能还会有问题要向你请教，方便的话加我吧~~ 2010-11-04 15:22:59
写改造载体，加上标签，之后再连目的基因。建议先随便找个带标签的载体连上你的目的基因后，连载体和目的基因一起切下来再连到你的目的载体上，这样会省些事，自己加标签很麻烦的，新手不建议做
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6楼2010-11-04 13:30:48
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
Claire_Liu(金币+2):多谢多谢！ 2010-11-04 15:24:20
pPIC3.5K本身没有his标签，设计引物的时候在上游引物起始密码子之后，或者下游终止密码子之前加上就可以了。
比如：在下游加5'-ATAAGAATGCGGCCGCTTAATGATGATGATGATGATGTCTCTCAAAGGGTA
GAATAG-3'

[ Last edited by susizheng on 2010-11-4 at 14:24 ]
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Thank-you，so-blue.
7楼2010-11-04 14:22:08
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playboy723

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2010-11-04 13:30:48:
写改造载体，加上标签，之后再连目的基因。建议先随便找个带标签的载体连上你的目的基因后，连载体和目的基因一起切下来再连到你的目的载体上，这样会省些事，自己加标签很麻烦的，新手不建议做

我07年的时候做过这个，和你的思路和方法都是一样的，但加的不是His而是TAT，这个最好有些分子基础做起来才快些，要不然很慢的，你找个人带带你吧，因为理论是一方面，实际操作才是最重要的。
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8楼2010-11-04 15:32:54
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