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Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】His标签 已有1人参与

我想把六个组氨酸的标签加到目的蛋白的N-末端,不知道改怎么做。。。
我看到pET28a 是带组氨酸标签的载体,但是我要用的是酵母表达载体pPIC3.5K,这个载体带有组氨酸标签吗?如果没有,我是不是要先把目的基因克隆到pET28a上呢?我应该怎么做呀?求各位师兄师姐帮帮我,谢谢~~~
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playboy723

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2010-11-04 13:30:48:
写改造载体,加上标签,之后再连目的基因。建议先随便找个带标签的载体连上你的目的基因后,连载体和目的基因一起切下来再连到你的目的载体上,这样会省些事,自己加标签很麻烦的,新手不建议做

我07年的时候做过这个,和你的思路和方法都是一样的,但加的不是His而是TAT,这个最好有些分子基础做起来才快些,要不然很慢的,你找个人带带你吧,因为理论是一方面,实际操作才是最重要的。
8楼2010-11-04 15:32:54
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):热心鼓励。 2010-11-04 10:57:17
Claire_Liu(金币+2): 2010-11-04 12:21:19
Claire_Liu(金币+2):多谢 2010-11-04 12:26:35
载体没有的话就在克隆的时候加上His-tag编码序列。
2楼2010-11-04 10:41:35
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲


dhd997(金币+1):热心鼓励。 2010-11-04 10:57:06
Claire_Liu(金币+2):不是很明白,能再详细一点吗?谢谢啦~~ 2010-11-04 12:26:23
载体上直接添加His-tag编码序列就可以,但是注意序列的顺序、碱基数目等别搞错了哦!
3楼2010-11-04 10:49:55
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Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-11-04 10:41:35:
载体没有的话就在克隆的时候加上His-tag编码序列。

是不是在设计引物的时候加上六个组氨酸的编码序列,那引物会不会太长了呢?
4楼2010-11-04 12:24:41
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