应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】His标签
81/1返回列表
查看: 1784  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】His标签 已有1人参与

我想把六个组氨酸的标签加到目的蛋白的N-末端，不知道改怎么做。。。
我看到pET28a 是带组氨酸标签的载体，但是我要用的是酵母表达载体pPIC3.5K，这个载体带有组氨酸标签吗？如果没有，我是不是要先把目的基因克隆到pET28a上呢？我应该怎么做呀？求各位师兄师姐帮帮我，谢谢~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-04 10:36:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):热心鼓励。 2010-11-04 10:57:17
Claire_Liu(金币+2): 2010-11-04 12:21:19
Claire_Liu(金币+2):多谢 2010-11-04 12:26:35
载体没有的话就在克隆的时候加上His-tag编码序列。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-04 10:41:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★
dhd997(金币+1):热心鼓励。 2010-11-04 10:57:06
Claire_Liu(金币+2):不是很明白，能再详细一点吗？谢谢啦~~ 2010-11-04 12:26:23
载体上直接添加His-tag编码序列就可以，但是注意序列的顺序、碱基数目等别搞错了哦！
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-11-04 10:49:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-11-04 10:41:35:
载体没有的话就在克隆的时候加上His-tag编码序列。

是不是在设计引物的时候加上六个组氨酸的编码序列，那引物会不会太长了呢？
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-04 12:24:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪会飞

荣誉版主 (文坛精英)

猪猪家族之猪会飞

优秀版主
加His-tag编码序列在载体上
赞一下 回复此楼
俺有一双隐形的翅膀~~~
5楼2010-11-04 12:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

playboy723

金虫 (正式写手)
Claire_Liu(金币+2):嗯，谢谢，我打算用你这个方法，你是做这方面的吗？我QQ是343468898，可能还会有问题要向你请教，方便的话加我吧~~ 2010-11-04 15:22:59
写改造载体，加上标签，之后再连目的基因。建议先随便找个带标签的载体连上你的目的基因后，连载体和目的基因一起切下来再连到你的目的载体上，这样会省些事，自己加标签很麻烦的，新手不建议做
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-04 13:30:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
Claire_Liu(金币+2):多谢多谢！ 2010-11-04 15:24:20
pPIC3.5K本身没有his标签，设计引物的时候在上游引物起始密码子之后，或者下游终止密码子之前加上就可以了。
比如：在下游加5'-ATAAGAATGCGGCCGCTTAATGATGATGATGATGATGTCTCTCAAAGGGTA
GAATAG-3'

[ Last edited by susizheng on 2010-11-4 at 14:24 ]
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
7楼2010-11-04 14:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

playboy723

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2010-11-04 13:30:48:
写改造载体，加上标签，之后再连目的基因。建议先随便找个带标签的载体连上你的目的基因后，连载体和目的基因一起切下来再连到你的目的载体上，这样会省些事，自己加标签很麻烦的，新手不建议做

我07年的时候做过这个，和你的思路和方法都是一样的，但加的不是His而是TAT，这个最好有些分子基础做起来才快些，要不然很慢的，你找个人带带你吧，因为理论是一方面，实际操作才是最重要的。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2010-11-04 15:32:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Claire_Liu 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +8 niko- 2026-03-19 9/450 2026-03-20 21:57 by luoyongfeng
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭