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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiuxiu190318

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】组氨酸标签的设计 已有4人参与

我要表达的蛋白序列需要加一个组氨酸标签,方便后面的分离纯化,请问我该怎么加?分离纯化后对标签进行切割常用的酶切位点又是怎样的呢?(最好能举例说明,非常感谢)
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


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His-tag-DDDDK-目标蛋白,用肠激酶酶切。
2楼2010-08-21 08:27:38
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xiuxiu190318

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-08-21 08:27:38:
His-tag-DDDDK-目标蛋白,用肠激酶酶切。

那可不可以加在C端呢,这个有没有什么判断的依据?我看到有人设计的序列是
ATG GGA TTA TTT CGC  CAT CAT CAC CAT CAC CAT  CGA AAA GGG. . . . . .用的是胰酶切的,胰酶和DK酶切哪一个更好呢?在其之前的氨基酸有没有什么作用?
路在脚下!
3楼2010-08-21 09:03:28
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月月大可

木虫 (著名写手)


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His在N段还是在C段要看你的看蛋白来决定。
就我目前的经验来看多数在N段的都设计有蛋白酶切位点,而C段的都直接加入终止密码子不要了。His标签也无需自己加,你可以选择两端都带标签的,比如pET28,上游使用Nco I 就不会在N段有标签了。下游引物不要加终止密码子,同时引入蛋白酶切点。什么酶看你自己选择了。有4度切的Thrombin就不错,TEV Pre都行。酶切的buffer也多少有些差别,自己选择吧
4楼2010-08-21 09:40:34
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xiuxiu190318

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-21 09:40:34:
His在N段还是在C段要看你的看蛋白来决定。
就我目前的经验来看多数在N段的都设计有蛋白酶切位点,而C段的都直接加入终止密码子不要了。His标签也无需自己加,你可以选择两端都带标签的,比如pET28,上游使用Nco  ...

我是要用全合成的方法合成基因序列,而载体上又没有标签,我是想可不可在起始密码子之后直接加His,或者在His后直接加终止密码子?
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5楼2010-08-21 09:53:51
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月月大可

木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by xiuxiu190318 at 2010-08-21 09:53:51:

我是要用全合成的方法合成基因序列,而载体上又没有标签,我是想可不可在起始密码子之后直接加His,或者在His后直接加终止密码子?

解决方法很简单,参照现有商业化的载体就行了。随便Google一些就有。
6楼2010-08-21 09:57:03
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zhandeguo1

银虫 (小有名气)

his tag


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有很多这方面的载体,很多生物公司或实验室都有。再根据载体的特性选择相应的酶切位点就好。
7楼2010-08-21 10:16:56
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xiuxiu190318 at 2010-08-21 09:03:28:

那可不可以加在C端呢,这个有没有什么判断的依据?我看到有人设计的序列是
ATG GGA TTA TTT CGC  CAT CAT CAC CAT CAC CAT  CGA AAA GGG. . . . . .用的是胰酶切的,胰酶和DK酶切哪一个更 ...

可加C或者N端,都有人用,根据切割方法决定,前提是保证切割后能得到你要的蛋白; 胰酶和EK酶切都可以,但是EK酶专一性更强。
8楼2010-08-21 11:54:57
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