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lihuahan

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zhonglin88 at 2014-03-27 19:51:18
你好,我想知道,我用的是pET28a,酶切位点时SacI和HindIII,表达的蛋白会带上His标签么?...

你好,也在做原核表达,想请教一下:1.表达载体应该怎么选择尼?后期是要用纯化目的蛋白做抗体的,pET-22,pET-28,pET-30,我应该怎么选择尼?他们各自有什么优缺点?
2.需要做融合表达的,N-端表达和C-端表达各有什么优缺点?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
11楼2014-04-30 20:21:30
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admission

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

一般用引物设计就可以了吧,设计引物的时候把6个his加上去,再加上蛋白部分序列,再加个酶切位点基本上就可以了吧
12楼2014-11-27 23:22:48
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maggie3277

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by juanzi7229 at 2012-12-10 10:12:45
我们都是通过设计引物的方式,反向引物在终止密码子前加上6个ATG就行了,这样既方便蛋白表达后的纯化,也方便检测是否成功表达。

这样设计以后引物会很长,会影响退火温度之类的吗
13楼2015-01-05 00:05:34
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781055707

木虫 (著名写手)

两种都行吧,怎么方便怎么来。
采菊东篱下,悠然见南山。
14楼2015-01-05 17:13:49
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