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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到我的蛋白上去？
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lihuahan

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhonglin88 at 2014-03-27 19:51:18
你好，我想知道，我用的是pET28a，酶切位点时SacI和HindIII，表达的蛋白会带上His标签么？...

你好，也在做原核表达，想请教一下：1.表达载体应该怎么选择尼？后期是要用纯化目的蛋白做抗体的，pET-22，pET-28，pET-30，我应该怎么选择尼？他们各自有什么优缺点？
2.需要做融合表达的，N-端表达和C-端表达各有什么优缺点？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2014-04-30 20:21:30
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admission

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

一般用引物设计就可以了吧，设计引物的时候把6个his加上去，再加上蛋白部分序列，再加个酶切位点基本上就可以了吧
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12楼2014-11-27 23:22:48
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maggie3277

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by juanzi7229 at 2012-12-10 10:12:45
我们都是通过设计引物的方式，反向引物在终止密码子前加上6个ATG就行了，这样既方便蛋白表达后的纯化，也方便检测是否成功表达。

这样设计以后引物会很长，会影响退火温度之类的吗
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13楼2015-01-05 00:05:34
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781055707

木虫 (著名写手)
两种都行吧，怎么方便怎么来。
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采菊东篱下，悠然见南山。
14楼2015-01-05 17:13:49
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