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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 请问His-tag(组氨酸标签)怎么加到我的蛋白上去? 已有1人参与

大家好,我实验过程中需要做几个抗体(这些是一抗),向老外咨询制作过程,回信说
The best is to subclone the hydrophilic loop of A proteins or cytoplasmic region of B proteins, express in the E. coli with His-tag, purify the protein and send it for immunization in Rabbit or Rat or Mouse.
因为我做的是两大类蛋白,姑且以A和B代替。
我看老外的意思是要我分别克隆一段特殊的序列(这个序列我知道,就是我的蛋白的其中一段),然后加上 His-tag(组氨酸标签)在E. coli 中表达,然后再提取纯化蛋白后在兔子或老鼠中获得抗体?
这中间有个问题,怎么加上 His-tag(组氨酸标签)?是直接设计引物引进 His-tag(组氨酸标签),还是按照有些人说的转到PET-30a这样还有 His-tag(组氨酸标签)的载体上获得?

请问有没有同学做过加 His-tag(组氨酸标签)的实验啊,请指教啊!

[ Last edited by silicare on 2014-3-28 at 14:03 ]
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781055707

木虫 (著名写手)

两种都行吧,怎么方便怎么来。
采菊东篱下,悠然见南山。
14楼2015-01-05 17:13:49
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与,欢迎常来 2012-12-10 08:10:32
都可以,只要表达的蛋白带His就可以了,有了这个标签是为了方便纯化。
静心做事。
2楼2012-12-08 21:21:01
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 列点你所说的文献就更好了 2012-12-10 08:09:40
最近要做这方面的东西,看过的文献是直接用引物的,自己木有尝试过
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
3楼2012-12-09 11:15:12
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-12-09 11:15:12
最近要做这方面的东西,看过的文献是直接用引物的,自己木有尝试过

有没有类似的文献?介绍几个我看看?谢谢了
4楼2012-12-09 22:21:32
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