24小时热门版块排行榜    

查看: 1212  |  回复: 4

wulie0411

木虫 (小有名气)

[求助] His tag结合问题 已有2人参与

我纯化了一个C端带His tag的蛋白,这个蛋白希望用于SPR检测。但是SPR芯片表面修饰了Ni-NTA之后,蛋白结合不到Ni-NTA上,蛋白纯化即是通过his-tag实现的,可是纯化之后缺无法结合到Ni-NTA表面,无法结合到修饰了Ni-NTA的SPR芯片的蛋白还是可以挂到Ni柱上。 修饰了Ni-NTA的SPR芯片结合其他his-tag蛋白没有任何问题。求助各位大侠,这究竟是怎么回事。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-05-12 22:30:17
结合常数的问题吧

修饰在SPR表面的Ni-NTA对目的蛋白吸附能力明显下降了,而你的蛋白对这个修饰很敏感。

以下是我的猜测,你的目的蛋白对Ni-NTA的吸附能力相比于其它的His蛋白而言,比较弱
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-05-10 20:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChemCom

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-05-12 22:30:27
你确定纯化到的蛋白是目的蛋白?His-tag的结合亲和性都很强的,SPR没有抓住,很可能你纯化的蛋白是杂蛋白。如果蛋白确定是目的蛋白,再考虑其它可能。

His-tag的亲和性受到几个因素的影响:1. 与蛋白本身的构象关系;2. pH值(这个可能性小);
3楼2014-05-12 08:00:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulie0411

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by BioChemCom at 2014-05-12 08:00:10
你确定纯化到的蛋白是目的蛋白?His-tag的结合亲和性都很强的,SPR没有抓住,很可能你纯化的蛋白是杂蛋白。如果蛋白确定是目的蛋白,再考虑其它可能。

His-tag的亲和性受到几个因素的影响:1. 与蛋白本身的构象关 ...

几乎可以确定是目的蛋白,因为目的蛋白是有颜色的,可以很明显的观察到。很久以前我曾今成功的抓到过,效果也很好,现在无论如何也抓不到了,郁闷啊。
4楼2014-05-12 20:42:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulie0411

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-05-10 20:55:58
结合常数的问题吧

修饰在SPR表面的Ni-NTA对目的蛋白吸附能力明显下降了,而你的蛋白对这个修饰很敏感。

以下是我的猜测,你的目的蛋白对Ni-NTA的吸附能力相比于其它的His蛋白而言,比较弱

文献中都是使用这种方法抓的这个蛋白,可是我却怎么也弄不出来,苦闷
5楼2014-05-12 20:43:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wulie0411 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 东南大学364求调剂 +4 JasonYuiui 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:36 by Linda Hu
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +12 enenenhui 2026-03-13 13/650 2026-03-16 08:30 by Linda Hu
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:14 by JourneyLucky
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
信息提示
请填处理意见