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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » His抗体检测不到His融合蛋白。。
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lizefan

木虫 (正式写手)

[求助] His抗体检测不到His融合蛋白。。 已有2人参与

把细菌中表达的酶构建到真核载体当中，其N端融合His6标签。转染到哺乳动物细胞之后，能检测到酶的活性，但是用Anti-His6的抗体做western blot杂不到酶（在细菌中能杂到）。之后，又在酶C端融合了Flag标签还是没有杂到。不知道是什么原因就是杂不到。。请问大神！谢谢！
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noimpossible！
1楼 2014-06-16 10:32:42
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lizefan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:35:50
lizefan: 金币+18, ★★★很有帮助 2014-09-16 15:25:14
是不是翻译过程中被剪切掉了

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2楼2014-06-16 11:45:16
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lizefan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-16 11:45:16
是不是翻译过程中被剪切掉了

有什么办法能杂到吗？（细菌里很好杂到）。。

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noimpossible！
3楼2014-06-16 15:45:48
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lizefan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-16 11:45:16
是不是翻译过程中被剪切掉了

能用什么方法确定是被切了吗？我是化学系的，不懂，，谢谢！
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noimpossible！
4楼2014-06-19 11:32:12
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
lizefan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:35:40
转染哺乳动物细胞时用的载体是什么，有本身的启动子或其他强启动子吗？
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5楼2014-06-19 17:06:24
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lizefan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-06-19 17:06:24
转染哺乳动物细胞时用的载体是什么，有本身的启动子或其他强启动子吗？

用的是pcDNA3.1载体。。基因本身没有启动子啊，插入别的基因能抗到his。http://www.uniprot.org/uniprot/P32961 这个基因抗不到。
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noimpossible！
6楼2014-06-19 20:47:16
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