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lizefan

木虫 (正式写手)

[求助] His抗体检测不到His融合蛋白。。 已有2人参与

把细菌中表达的酶构建到真核载体当中,其N端融合His6标签。转染到哺乳动物细胞之后,能检测到酶的活性,但是用Anti-His6的抗体做western blot杂不到酶(在细菌中能杂到)。之后,又在酶C端融合了Flag标签还是没有杂到。不知道是什么原因就是杂不到。。请问大神!谢谢!
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noimpossible!
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lizefan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-06-19 17:06:24
转染哺乳动物细胞时用的载体是什么,有本身的启动子或其他强启动子吗?

用的是pcDNA3.1载体。。基因本身没有启动子啊,插入别的基因能抗到his。http://www.uniprot.org/uniprot/P32961 这个基因抗不到。
noimpossible!
6楼2014-06-19 20:47:16
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lizefan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:35:50
lizefan: 金币+18, ★★★很有帮助 2014-09-16 15:25:14
是不是翻译过程中被剪切掉了

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-16 11:45:16
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lizefan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-16 11:45:16
是不是翻译过程中被剪切掉了

有什么办法能杂到吗?(细菌里很好杂到)。。

[ 发自小木虫客户端 ]
noimpossible!
3楼2014-06-16 15:45:48
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lizefan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-16 11:45:16
是不是翻译过程中被剪切掉了

能用什么方法确定是被切了吗?我是化学系的,不懂,,谢谢!
noimpossible!
4楼2014-06-19 11:32:12
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