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铁虫 (正式写手)

[交流] 镍柱原理的问题

NI和组氨酸标签结合，之后和咪唑结合而洗下蛋白，但结合上的咪唑是怎么下去的？？？？下次蛋白怎么还能结合上呢？浓度问题吗？

1楼 2012-04-06 19:16:14

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木虫之王 (文学泰斗)

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loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与

也想学习一下

2楼2012-04-06 20:17:00

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至尊木虫 (知名作家)

★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与

个人认为咪唑与镍柱结合是可逆的，外界咪唑浓度低时，咪唑和镍柱分离，最终达到咪唑浓度一致，因此后期镍柱处理可通过加入低浓度的裂解液来降低镍柱中的咪唑浓度。

3楼2012-04-06 22:49:16

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金虫 (正式写手)

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loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与

1.咪唑和His竞争Ni，随着咪唑浓度的提高，会将与Ni结合的蛋白洗脱下来。实现分级洗脱蛋白，达到分离蛋白的目的。
2.后期可以用EDTA洗Ni柱，将Ni都剥离下来，进而再生柱子。将EDTA除净后即可再挂Ni。

4楼2012-04-06 22:56:30

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