24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 879  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tuhua

新虫 (小有名气)

[求助] 扩增不出产物 已有5人参与

本人刚合成的引物正在做梯度PCR,目的条带为1650bp,公司合成的单子显示的上游引物为58.3,下游为58.9。用普通的aq酶没有扩增出来, 引物二聚体也没有,所用的枪头,管子都是刚灭菌的,cDNA没有问题,在超净工作台上操作。体系是20ul ,具体如下,
Taq酶  0.3ul,
10*Buffer 2 ul,
dNTP  1ul,
cDNA 0.5ul,
Mgcl2  1.2ul (25mM)
上游引物0.5
下游引物0.5
ddH2O  14ul


95      5min
95     30s
54/64  50s
72     100s
28个循环
72    10min

请各位帮忙分析下,是什么原因呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
tuhua(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:17:17
tuhua: 金币+1 2014-09-07 18:48:47
你确定这个转录本在这种CDNA的表达量高吗,可以查一下BIOGPS?出不来最好p个35-40cyc
5楼2014-08-27 14:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-23 20:29:19
tuhua: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-08-23 21:40:30
tuhua: 金币+1 2014-09-07 18:49:05
什么都没有,先要排除药品和仪器的问题,然后你用58度跑次试试,别梯度了,可能是梯度的问题
2楼2014-08-23 07:41:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
tuhua: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-09-07 18:48:34
1、这个最佳退火温度就是58度左右,不需要梯度。

2、引物和器材应该没有问题

3、模板用的cDNA,所以问题也可能出在模板上,建议用内参引物排除模板可能出现的问题

4、酶也可能出现问题,用的时间长了效率也会降低的

5、再就是电泳,不知道Marker有没有出来

6、你的循环次数是不是有点少,建议加到30——35个循环


以上个人见解,仅供参考
没有做不到,只有想不到!
3楼2014-08-25 22:27:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


tuhua: 金币+1 2014-09-07 18:48:41
退火试下60度   应该可以
4楼2014-08-26 10:56:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 326求调剂 +5 Shansyn 2026-04-10 5/250 2026-04-10 22:23 by 猪会飞
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +11 振—TZ 2026-04-10 11/550 2026-04-10 21:51 by blankyung
[考研] 283求调剂 +21 那个噜子 2026-04-09 21/1050 2026-04-10 21:18 by zhouxiaoyu
[考研] 266求调剂 +29 阳阳哇塞 2026-04-07 29/1450 2026-04-10 16:20 by 高维春
[考研] 293调剂 +25 yj1221 2026-04-08 26/1300 2026-04-10 15:02 by 柴小白
[考研] 复试调剂,一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 311求调剂 +6 surte 2026-04-08 13/650 2026-04-09 14:00 by surte
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 材料考研求调剂总分280 +30 mkjlz1 2026-04-06 35/1750 2026-04-08 21:25 by cyh—315
[考研] 材料科学与工程320求调剂,080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 305求调剂 +4 77Qi 2026-04-06 4/200 2026-04-07 20:06 by shanqishi
[考研] 312求调剂 +18 gtw1 2026-04-06 20/1000 2026-04-07 18:16 by 蓝云思雨
[考研] 301求调剂 +18 121. 2026-04-04 18/900 2026-04-07 17:49 by 蓝云思雨
[考研] 085405软件工程301分求调剂,专硕可跨专业,四六级已过 +3 静静想想 2026-04-05 3/150 2026-04-06 15:23 by nepu_uu
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 326求调剂 +3 顾若浮生 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:32 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 320求调剂 +3 一样圆 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:29 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见