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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何避免单引物扩增，扩出的目的片段为什么都是单引物扩增
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赵建雪

银虫 (正式写手)

[求助] 如何避免单引物扩增，扩出的目的片段为什么都是单引物扩增

扩未知片段，分两次扩出来了两片段，测序是要的片段，然后连起来想一次扩出来，但测序却是单引物及下游引物扩增，为什么呀？求指导如何避免
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自己的路只有自己能负责
1楼2013-11-25 23:11:37
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-26 11:57:45
赵建雪: 金币+2 2014-01-20 10:55:15
重新设计引物，可能是你的序列有些特殊
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2楼2013-11-26 11:12:19
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
赵建雪: 金币+2 2014-01-20 10:55:07
中间可能有内含子，有一定的影响……
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我不会！
3楼2013-11-26 15:28:20
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-11-26 15:28:20
中间可能有内含子，有一定的影响……

没有扩内含子部分
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自己的路只有自己能负责
4楼2013-11-27 21:14:34
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
赵建雪: 金币+2 2014-01-20 10:54:58
赵建雪: 金币+1 2014-02-27 12:10:07
检查引物设计 看看两端Tm值相差是否过大（与GC含量有关）
适当降低退火温度
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5楼2013-11-28 02:32:31
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