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dai1103

银虫 (小有名气)

[求助] 反转录试剂盒选择 已有4人参与

亲们:我的实验是提取病毒RNA(提取的病毒浓度不高),然后反转录做普通PCR,目的条带250bp-900bp,请问,选择哪个反转录试剂盒好点?
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johnkm66

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖


dai1103(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:22:18
反转录时,常常由于RNA二级结构的存在,导致结果不理想。可以考虑选择退火温度可至55度甚至65度的试剂盒(酶)。65度退火,正好可以让二级结构完全打开。
6楼2014-08-26 16:08:17
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普通回帖

和一

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dai1103: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2014-08-21 22:20:30
dai1103: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-09-04 15:34:37
反转录试剂盒其实都差不多,我们都是用的国产的,效果也很好, 国外公司的可以选 Invitrogen或者TAKARA 的。
2楼2014-08-21 21:37:46
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dai1103

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 和一 at 2014-08-21 21:37:46
反转录试剂盒其实都差不多,我们都是用的国产的,效果也很好, 国外公司的可以选 Invitrogen或者TAKARA 的。

做普通PCR 选择Takala的可以吗?我的病毒浓度不高。有用过Takala的RR037A,刚开始做出来了30多个,后来就没有结果了~
3楼2014-08-21 21:58:29
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
dai1103(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:47:59
感觉都差不多
我一直用promega的
4楼2014-08-22 03:28:09
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yypyy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


dai1103(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:48:06
可以试试Thermo的RevertAid或Maxima反转录试剂盒,用着挺不错的~
5楼2014-08-25 14:36:57
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锐活宝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-26 16:08:17
反转录时,常常由于RNA二级结构的存在,导致结果不理想。可以考虑选择退火温度可至55度甚至65度的试剂盒(酶)。65度退火,正好可以让二级结构完全打开。

推荐你用vazyme生物的逆转录酶!主要优势就是耐高温,针对复杂的二级结构都可以解开!
7楼2014-08-26 23:11:32
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-26 16:08:17
反转录时,常常由于RNA二级结构的存在,导致结果不理想。可以考虑选择退火温度可至55度甚至65度的试剂盒(酶)。65度退火,正好可以让二级结构完全打开。

那按照大侠所说的 是不是延伸温度尽量可以高点呢?我用的是TAKARA的试剂盒
生命不息奋斗不止
8楼2014-08-26 23:43:56
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johnkm66

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖


dai1103(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:22:34
引用回帖:
8楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2014-08-26 23:43:56
那按照大侠所说的 是不是延伸温度尽量可以高点呢?我用的是TAKARA的试剂盒...

Takara的产品不错,但并不适合高达65度这样的反应温度。据我所知,市面上有两家公司的产品具有类似性能。Thermo有这样的产品,推荐温度是50度,最高声称可达60度;国产的成都福际生物有,可达65度,可以试试。不知道你在哪个城市,不一定有代理,可以搜一下。
9楼2014-08-27 11:16:28
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-27 11:16:28
Takara的产品不错,但并不适合高达65度这样的反应温度。据我所知,市面上有两家公司的产品具有类似性能。Thermo有这样的产品,推荐温度是50度,最高声称可达60度;国产的成都福际生物有,可达65度,可以试试。不知 ...

好的  非常感谢
生命不息奋斗不止
10楼2014-08-27 12:57:09
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