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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反转录试剂盒选择
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dai1103

银虫 (小有名气)

[求助] 反转录试剂盒选择已有4人参与

亲们：我的实验是提取病毒RNA（提取的病毒浓度不高），然后反转录做普通PCR，目的条带250bp-900bp，请问，选择哪个反转录试剂盒好点？
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1楼2014-08-21 21:34:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

johnkm66

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
dai1103(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:22:18
反转录时，常常由于RNA二级结构的存在，导致结果不理想。可以考虑选择退火温度可至55度甚至65度的试剂盒（酶）。65度退火，正好可以让二级结构完全打开。
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6楼2014-08-26 16:08:17
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和一

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dai1103: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2014-08-21 22:20:30
dai1103: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-09-04 15:34:37
反转录试剂盒其实都差不多，我们都是用的国产的，效果也很好， 国外公司的可以选 Invitrogen或者TAKARA 的。
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2楼2014-08-21 21:37:46
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dai1103

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 和一 at 2014-08-21 21:37:46
反转录试剂盒其实都差不多，我们都是用的国产的，效果也很好， 国外公司的可以选 Invitrogen或者TAKARA 的。

做普通PCR 选择Takala的可以吗？我的病毒浓度不高。有用过Takala的RR037A，刚开始做出来了30多个，后来就没有结果了~
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3楼2014-08-21 21:58:29
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dai1103(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:47:59
感觉都差不多
我一直用promega的
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4楼2014-08-22 03:28:09
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yypyy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
dai1103(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:48:06
可以试试Thermo的RevertAid或Maxima反转录试剂盒，用着挺不错的~
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5楼2014-08-25 14:36:57
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锐活宝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-26 16:08:17
反转录时，常常由于RNA二级结构的存在，导致结果不理想。可以考虑选择退火温度可至55度甚至65度的试剂盒（酶）。65度退火，正好可以让二级结构完全打开。

推荐你用vazyme生物的逆转录酶！主要优势就是耐高温，针对复杂的二级结构都可以解开！
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7楼2014-08-26 23:11:32
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-26 16:08:17
反转录时，常常由于RNA二级结构的存在，导致结果不理想。可以考虑选择退火温度可至55度甚至65度的试剂盒（酶）。65度退火，正好可以让二级结构完全打开。

那按照大侠所说的 是不是延伸温度尽量可以高点呢？我用的是TAKARA的试剂盒
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生命不息奋斗不止
8楼2014-08-26 23:43:56
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johnkm66

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
dai1103(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:22:34
引用回帖:
8楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2014-08-26 23:43:56
那按照大侠所说的 是不是延伸温度尽量可以高点呢？我用的是TAKARA的试剂盒...

Takara的产品不错，但并不适合高达65度这样的反应温度。据我所知，市面上有两家公司的产品具有类似性能。Thermo有这样的产品，推荐温度是50度，最高声称可达60度；国产的成都福际生物有，可达65度，可以试试。不知道你在哪个城市，不一定有代理，可以搜一下。
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9楼2014-08-27 11:16:28
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-27 11:16:28
Takara的产品不错，但并不适合高达65度这样的反应温度。据我所知，市面上有两家公司的产品具有类似性能。Thermo有这样的产品，推荐温度是50度，最高声称可达60度；国产的成都福际生物有，可达65度，可以试试。不知 ...

好的  非常感谢
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生命不息奋斗不止
10楼2014-08-27 12:57:09
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