应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建一支失败
111/2返回列表12下一页
查看: 1409  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

你太善良

新虫 (著名写手)

[求助] 载体构建一支失败 已有4人参与

最近构建一条基因的6个载体，已经构建好了5个，另外一个就是PBridge没有构建成功，完全什么都不会张，2个酶切位点隔了4个碱基，尝试了双酶切和分步酶切都不行。还有一个现象就是，PBridge这个载体接种的时候有时间会长而有时间不长，我觉得问题可能出在这里，请大家帮忙分析分析
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-13 14:53:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zero19871029

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能把具体情况说清楚点吗，比如空载体能不能切开
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-13 17:29:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ranen516

金虫 (正式写手)
不太明白！！
回复此楼
3楼2014-08-13 22:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peng1997

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-08-20 15:38:46
间隔近 双酶切的时候相互影响 分步的时候，后一个效率不高
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-14 00:53:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

你太善良

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-13 17:29:49
能把具体情况说清楚点吗，比如空载体能不能切开

单酶切都能切开啊。不能切开还做什么啊
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-14 08:03:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞奔的大象

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-14 11:06:24
建议将空载测序。或者换一个别人保存的质粒重新转化，抽提，酶切。我以前也遇到过这个问题，或许不是酶切的问题，是你质粒抽提的问题。
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-14 09:41:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小豆子J

铜虫 (初入文坛)
建议转化做个空质粒对照，以确保质粒和感受态细胞没有问题，如果空质粒长斑而连接产物不长，说明质粒酶切开了，问题可能就在于片段没有切开。
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-14 15:44:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zero19871029

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 你太善良 at 2014-08-14 08:03:48
单酶切都能切开啊。不能切开还做什么啊...

我的意思是你既然想要向人求助，就应该把你的操作流程以及遇到的问题写清楚一点，不是撂这一句话说的莫名其妙让人猜是怎么回事
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-14 17:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangnan1987

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-20 15:39:00
建议你用一个酶,国产的ClonExpressTMII(价格便宜一些),进口的gibson Assembly®Master Mix(效率高一些),说明书在网上能找到,只要质粒能被线性化,就一定能构建成功,这个酶非常好用.就是质粒不能被线性化,你也可以PCR把质粒扩增出来.
赞一下 回复此楼
9楼2014-08-14 21:42:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励回帖交流！ 2014-08-20 15:39:09
两个酶切位点只相隔4个碱基，比较危险吧
再就是空载体会不会长呢 不会是抗性弄混了吧
虽然都是小细节 我就经常犯这种错误。。
祝顺利
赞一下 回复此楼
生活是一面镜子，要笑着面对！
10楼2014-08-16 20:06:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 你太善良 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +7 YXCT 2026-03-01 7/350 2026-03-02 08:29 by houyaoxu
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭