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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建一支失败
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你太善良

新虫 (著名写手)

[求助] 载体构建一支失败 已有4人参与

最近构建一条基因的6个载体，已经构建好了5个，另外一个就是PBridge没有构建成功，完全什么都不会张，2个酶切位点隔了4个碱基，尝试了双酶切和分步酶切都不行。还有一个现象就是，PBridge这个载体接种的时候有时间会长而有时间不长，我觉得问题可能出在这里，请大家帮忙分析分析
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1楼 2014-08-13 14:53:56
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小豆子J

铜虫 (初入文坛)
建议转化做个空质粒对照，以确保质粒和感受态细胞没有问题，如果空质粒长斑而连接产物不长，说明质粒酶切开了，问题可能就在于片段没有切开。
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7楼2014-08-14 15:44:06
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zero19871029

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能把具体情况说清楚点吗，比如空载体能不能切开
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2楼2014-08-13 17:29:49
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peng1997

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-08-20 15:38:46
间隔近 双酶切的时候相互影响 分步的时候，后一个效率不高
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4楼2014-08-14 00:53:21
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你太善良

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-13 17:29:49
能把具体情况说清楚点吗，比如空载体能不能切开

单酶切都能切开啊。不能切开还做什么啊
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5楼2014-08-14 08:03:48
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