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一旺百旺新虫 (著名写手)
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[求助]
测序的时候测序要求的选项怎么选？ 已有6人参与
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测序要求有六个选项： 正向 反向 双向 单向 单向测通 双向测通 这六个选项都有什么区别呀，，，完全不懂，求教。。。。越详细越好。。。完全的菜鸟一个 |
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 生物科学知识与技术 |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-08-11 20:15:05
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2楼2014-08-11 17:59:21
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币-1, 屏蔽内容, 乱码 2014-08-13 22:49:38
西门吹雪170: 金币-1, 屏蔽内容, 乱码 2014-08-13 22:49:38
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3楼2014-08-11 20:13:01
ssssllllnnnn 
至尊木虫 (知名作家)
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-13 22:50:06
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如果你自己提供测序引物，就不存在这个问题了（测序引物决定了方向）。如果用公司的引物，则会有这个问题。就一般测序而言，测一个方向就够了。 如果你要测定目标片段不是很大（如500bp左右），不管是正向还是反向都可以全部读出了。所以选正向和反向没有本质区别。 如果你的目标DNA较大，而且需要全部测出序列，这时则可能需要正反方向同时测，以便把整个顺序都读出。 如果你做的是点突变或其他突变体，而突变位置又距离上下游插入点较远，则可以在突变位置附近合成一测序引物，便于测序。 |
4楼2014-08-11 21:13:56
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-13 22:50:44
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楼主你好，我刚毕业，在测序公司做技术服务的。你首先要根据你的样品类型，如果你是PCR片段的话，一般是自己提供引物的，如果片段大小在800以内，如果没有特殊结构，正向反向都是可以测通的。 如果你是菌液或质粒的话，公司一般会有载体上的通用引物的，也是根据你的片段大小来的，你的插入片段比较小的话只要一个方向就基本能测通，如果在800-1500基本是2个方向也可以测通的，如果您的片段更大的话，你要求双向测通，这时候公司会在测过两个反应后给你设计引物继续测通的，设计的引物是要收合成费的。 |
5楼2014-08-11 22:12:15
6楼2014-08-12 02:53:21
一旺百旺
新虫 (著名写手)
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7楼2014-08-12 08:16:00
看说明书吧，正向反向差不多，没有什么区别；双向就是一个正向一个反向，然后对结果进行整合；单向就是单向测，没有双向测精确；一般测序超过800就测不准了，需要设计中间引物什么的，这就是测通吧。。。 8楼2014-08-12 11:08:19