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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 测序公司采用的测序原理是什么？ 已有2人参与

各位大虾：知不知道一些测序公司，比如华大、生工、英潍，现在测序一般用的什么技术，原理是什么？
我主要是想搞清楚他们反馈的测序结果是那条链的序列。
比如我是用pMD 19-T载体克隆后送测的，我要求正向测序，结果他们用M13F引物测的，那么得到的序列是正义链还是反义链呢？
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1楼 2013-12-25 15:03:26
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sj082csh

银虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:55:11
柠檬可乐星: 金币+3 2013-12-26 15:08:06
gyesang: 回帖置顶 2013-12-26 15:12:09
gyesang: MolEPI+1, 回答的很好！ 2013-12-26 15:15:34
1、你的目的片段和PMD-19T载体连接是不定向的
2、测序公司所说的正向和反向是针对载体（如PMD-19T）来说的
3、对于PMD-19T来说，M13F引物所在的那条链即为所谓的正向（正义），M13R为反向（反义）
4、因此，如果你不知道你的目的片段的连接方向如何，那么正向测序结果既也有可能测出你的目的片段是正向也有可能是反向
5、可以用M13F和你的目的片段的反向引物跑PCR检测，如果能跑出片段则为正向连接，如果M13F和你的目的片段正向引物能跑出来，则为反向连接；
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8楼2013-12-25 17:25:08
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:54:59
一般是双脱氧链终止法，M13F得到的是正义链
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2楼2013-12-25 15:31:54
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

http://blog.sciencenet.cn/blog-757603-679907.html
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3楼2013-12-25 15:45:27
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sarah-miao at 2013-12-25 15:31:54
一般是双脱氧链终止法，M13F得到的是正义链

您好！还有些问题请教：
我一直把M13F当做上游引物，如果没错的话，就有问题了，今天在网上查，有人说“与mRNA相同的引物为正义引物”，如果他说的是正确的，那么用上游引物测序又怎么能得到正义链呢？
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4楼2013-12-25 15:48:09
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2013-12-25 15:48:09
您好！还有些问题请教：
我一直把M13F当做上游引物，如果没错的话，就有问题了，今天在网上查，有人说“与mRNA相同的引物为正义引物”，如果他说的是正确的，那么用上游引物测序又怎么能得到正义链呢？...

额，我能弱弱地问下，你要得到正义链是做什么用呢
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5楼2013-12-25 15:50:14
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sarah-miao at 2013-12-25 15:50:14
额，我能弱弱地问下，你要得到正义链是做什么用呢...

不是非要得到正义链或是反义链，只是想搞清楚这里边的原理和概念，帮助自己理解。谢谢
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6楼2013-12-25 16:27:02
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
柠檬可乐星: 金币+2 2013-12-26 15:08:28
引用回帖:
6楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2013-12-25 16:27:02
不是非要得到正义链或是反义链，只是想搞清楚这里边的原理和概念，帮助自己理解。谢谢...

M13f就是19T的上游引物啊，所以测出来的就是正向序列。。。如果是用M13r测序，得到的序列就是反向互补的序列，进行序列分析的时候得reverse的
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7楼2013-12-25 16:30:45
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