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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 割胶一条带 胶回收之后两条带 怎么破
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octopus2012

铁虫 (初入文坛)

[求助] 割胶一条带 胶回收之后两条带 怎么破 已有11人参与

最近做PCR
目的条带800bp
跑胶之后也只有一条带是800bp
割胶之后回收跑胶检测的时候就出现了两条带
亮一点的800bp目的条带 弱一点的600bp杂带
最开始怀疑是胶回收试剂盒的试剂被污染了 割空胶做了一次胶回收之后没有问题 所以得出结论不是胶回收试剂盒的问题
现在不知道什么原因了
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O Ye
1楼 2014-08-11 11:28:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lhxbio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也碰到过类似情况，用了各种办法也无法解决。建议：1，不用跑胶回收，直接用PCR纯化kit，或者把PCR产物直接用胶回收试剂盒纯化。然后将纯化产物在跑胶检测一下看看。2，若还是不行，别管他，纯化完直接往下做。
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7楼2014-08-12 10:38:16
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niil

金虫 (正式写手)
回收之后经常会遇到这样情况。
直接测序的话不是很好。
可以进行TA克隆，通过单克隆的菌落PCR鉴定，条带大小一致就送样测序呗。
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Stop fighting,let it flow.
9楼2014-08-12 15:56:06
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by octopus2012 at 2014-08-12 10:11:14
全跑了之后 800割胶回收 再跑胶检测 还是有弱弱的600的带...

LOADing BuFFEr没有污染吧？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2014-08-12 17:56:09
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普通回帖

ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-11 19:20:56
你可以把第一次回收的产物全部跑胶，然后再把800bp的回收了嘛  要不然就在重新P一次啦
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2楼2014-08-11 12:05:07
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protein780

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-11 19:20:59
同意楼上的观点，生物试验中干扰结果的因素有可能非常多，走下去才是重要的。
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3楼2014-08-11 13:18:25
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馨-馨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-11 19:21:02
也可能是你电泳过程中，胶浓度低，条带分离的不好。。
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4楼2014-08-11 14:28:11
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七号码头

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-11 19:21:08
对于这种情况 才800  测序吧 我也这样
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情绪化的偏执狂
5楼2014-08-11 15:01:43
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octopus2012

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ncuduhan at 2014-08-11 12:05:07
你可以把第一次回收的产物全部跑胶，然后再把800bp的回收了嘛  要不然就在重新P一次啦

全跑了之后 800割胶回收 再跑胶检测 还是有弱弱的600的带
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O Ye
6楼2014-08-12 10:11:14
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wakasasa

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那就再切一次嘛，没准你切的块大，把其他的切进去了

[ 发自小木虫客户端 ]
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445566
8楼2014-08-12 14:17:54
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