| 查看: 2829 | 回复: 8 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
蛋白原核表达和包涵体纯化问题 已有2人参与
|
||||
|
大家好，最近在原核表达两个蛋白，一个是153AA，一个是166AA，均有信号肽，用salI和NotI酶切位点克隆进PET28A载体中，30度诱导4h, 153AA的大表有表达，大概是20KD，表达量小，估计3%，166AA的大表没有表达。 用含溶菌酶的裂解液裂解（没有超声裂解）后，发现二者主要都是包涵体表达，因为上清中很少蛋白，用8M尿素变性（变性时由于用的是1.5ml离心管做的小样，没有超声处理，所以也是溶解一部分），之后取变性的样品上清和沉淀SDS-PAGE电泳，发现二者分子量一样是14KD，很奇怪的现象,难道是提前终止了么？还是因为变性不充分，蛋白没有完全展开，但是也不至于分子量是一样，并且偏小这么多吧？大家遇到过这样的问题么？谢谢！ 对于这个现象，把诱导前的菌做了PCR鉴定，相互之间是没有污染的，并且166AA的克隆是送测序过的，所以克隆构建也没有问题。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化与检测 |
» 猜你喜欢
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有17人回复
-
基金不中，共勉
已经有4人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有5人回复
-
我不理解！
已经有23人回复
-
2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战
已经有10人回复
-
系统查不到
已经有10人回复
-
怎么查啊
已经有5人回复
-
范进中举一文的中心思想
已经有10人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有25人回复
-
2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？
已经有28人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达His纯化仍有杂蛋白
已经有7人回复
- 原核表达蛋白纯化
已经有32人回复
- 大肠杆菌BL21表达包涵体的问题
已经有8人回复
- 毕赤酵母表达蛋白纯化
已经有10人回复
- 蛋白表达及纯化
已经有29人回复
- 包涵体有活性吗？
已经有10人回复
- 请大家帮忙分析蛋白纯化的结果
已经有23人回复
- 关于重组蛋白包涵体的溶解及复性
已经有5人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 高效液相纯化包涵体蛋白
已经有4人回复
- 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？
已经有20人回复
- 如何解决包涵体复性沉淀问题？
已经有16人回复
- 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦
已经有18人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因
已经有10人回复
- 【求助】包涵体表达与可溶性表达
已经有6人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
- [求助]原核表达如何减少包涵体
已经有23人回复
7楼2014-08-07 08:39:29
2楼2014-08-05 10:07:24
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-06 09:06:10
zbblpp: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-08-06 15:40:06
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-06 09:06:10
zbblpp: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-08-06 15:40:06
| 给你个包涵体纯化、变性和复性的实验流程吧，具体你的问题改日再讨论，今天我没有时间了。 |
» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : Purificationofinclusionbodiesandrefoldingofproteins.pdf
2014-08-05 10:38:08, 93.73 K
3楼2014-08-05 10:31:03
4楼2014-08-05 16:18:52
