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mmojf

新虫 (初入文坛)

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[求助] 原核表达不表达已有6人参与

求助，刚开始做表达，目的是为了研究蛋白功能，但是在表达上就遇到了困难，RNA序列是1224bp，进行了在线稀有密码子分析和可溶性分析，结果如附件图：含有20几个稀有密码子，在大肠杆菌中“The input sequence has a 0.0 percent chance of solubility when overexpressed in E. Coli.”；载体为PET28a，选择酶切位点分别为Ecor1和Hind3，表达感受态使用过BL21（DE3）和ROSETTA。蛋白不表达，应该怎样解决呢，求高手解答

可溶性.jpg

密码子.jpg

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1楼2014-07-30 09:41:42

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西门吹雪170

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引用回帖:

7楼: Originally posted by dy_414 at 2014-07-31 01:26:28
第一，20个rare codon不是个小数目，lz可以使用rosetta表达，现在国内价格都不贵，效果很好。
第二，PET28本身表达效率就不是很高，建议尝试其他载体。

祝好运

请问你有相关的文献证明pET28a表达效率低吗？