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小冀-版主 (著名写手)
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pMD-19T载体与目的片段的连接问题 已有6人参与
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之前计划目的基因（3.6Kb）与pMD-19T进行TA克隆连接，目的片段用primerstar高保真酶后加A连接，氨苄板生长，鉴定后发现是载体自连；后来用Taq酶PCR扩增后直接与pMD-19T载体链接，最后发现还是自连的···发现这都不行后就进行一步克隆（ClonExpressTM快速克隆技术），之前认为在载体是线性的，就直接连了，但是没有连上，氨苄平板上没长；后来用以前构建好的质粒进行双酶切后进行一步克隆，可是氨苄平板上还是没有长···各位大神，求助··· 转化条件： 感受态是自己用氯化钙法做的，以前也是用它来做转化，都可以的··· 热击90s后，37℃活化1h后，将转化液浓缩全部涂平板··· |
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