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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎样用乙醇沉淀的方法纯化酶切体系中的DNA
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博克侬浮码

银虫 (小有名气)

[求助] 怎样用乙醇沉淀的方法纯化酶切体系中的DNA 已有1人参与

听说乙醇沉淀法可以很好的纯化单酶切体系中的DNA，希望能给出具体的方案！
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1楼 2014-07-23 17:09:40
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
博克侬浮码(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:35:32
(1)加入1/10体积的3M 醋酸钠（pH 5.2）于DNA溶液中，使其最终浓度为0.3 M。
(2)加入2.5倍体积无水乙醇混合后，置于-20度 中30~60分钟(若DNA小于1kb或量比较少时，应把溶液放在-70 下2小时，若DNA小于200 bp时，加入10 mM MgCl2 有助于DNA回收。)
(3)12,000 rpm离心10分钟，小心倒掉上清液，管底沉淀75%乙醇漂洗一遍
(4)12000 rpm离心10min，小心倒掉上清液，真空干燥，加入适当的TE buffer或者水溶解。
(5)取1ul测定浓度，其余的分装保存。

注意
1.你DNA的量越大乙醇沉淀效果越好，DNA的量越小损失率越大，甚至加了无水乙醇冰置后肉眼看不到沉淀
2.离心后倒上清不注意容易把沉淀也给倒出去导致最后啥也没有
3.弃去上清和干燥不彻底，导致样品中有乙醇干扰。
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大家相互帮助哈
2楼2014-07-23 19:37:43
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博克侬浮码

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-23 19:37:43
(1)加入1/10体积的3M 醋酸钠（pH 5.2）于DNA溶液中，使其最终浓度为0.3 M。
(2)加入2.5倍体积无水乙醇混合后，置于-20度 中30~60分钟(若DNA小于1kb或量比较少时，应把溶液放在-70 下2小时，若DNA小于200 bp时，加入 ...

学习了，谢谢
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3楼2014-07-24 09:19:12
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